Influência dos fatores bmp15 e gdf9 livres em matriz de hidrogel na recuperação folicular pós transplante e no cultivo in vitro de tecido ovariano criopreservado de cadelas

Abstract

A criopreservação de tecido ovariano é uma tecnologia de reprodução assistida eficaz para a preservação da fertilidade feminina e também para a conservação de espécies ameaçadas de extinção. Entretanto, essa técnica enfrenta desafios devido à perda folicular que ocorre durante o congelamento deste tecido, além do período de isquemia durante o transplante e a quantidade limitada de oxigênio no cultivo in vitro que também afetam a viabilidade dos folículos ovarianos. Assim, o desenvolvimento de biotecnologias reprodutivas é necessário para a preservação e recuperação folicular, como a utilização de uma matriz hidrogel que simule o microambiente ovocitário, podendo-se adicionar fatores de crescimento, como o GDF9 e o BMP15, que atuam diretamente nas células da granulosa dos folículos. O presente estudo buscou avaliar o efeito dos fatores BMP15 e GDF9 livres, incorporados em matriz de hidrogel, na recuperação e viabilidade folicular de tecido ovariano criopreservado de cadelas após transplante ou cultivo in vitro. Para isso, foram coletados ovários de 16 cadelas, cujos fragmentos foram vitrificados e, após o descongelamento, distribuídos em grupos: controle fresco (G1), controle da criopreservação (G2), controle negativo (G3) e grupos tratados com BMP15 (G4), GDF9 (G5) ou a combinação de ambos (G6) e incorporados à uma matriz de hidrogel. Os fragmentos foram cultivados in vitro ou transplantados em camundongos imunossuprimidos por um período de 21 dias. Foram feitas análises de histologia clássica para classificação morfológica dos folículos e análises imunohistoquímicas com marcadores para a identificação de proliferação (Ki-67) apoptose (caspase) celular. Os resultados demonstraram que o grupo controle fresco (G1) obteve a maior proporção de folículos morfologicamente normais (MN). Dentre os grupos tratados com fatores de crescimento, o uso de BMP15 (G4) no transplante apresentou melhor desempenho na preservação de folículos primordiais MN (61,6%) em comparação ao cultivo. A combinação BMP15+GDF9 (G6) no cultivo resultou em taxas superiores de folículos em crescimento MN (42,3%) do que o uso isolado de cada fator. A viabilidade folicular pode ser observada pela marcação positiva para Ki-67 em 98,7% dos folículos transplantados e pela ausência de apoptose em 99,1% dos mesmos. Deste modo, a incorporação dos fatores de crescimento BMP15 e GDF9 em matriz de hidrogel favorece a sobrevivência e a recuperação do desenvolvimento folicular