Marcadores bioquímicos para a competência ovocitária em bovinos

Abstract

Este estudo teve como objetivo avaliar a associação de características bioquímicas do ambiente folicular com a capacidade do ovócito de formar embrião, identificando marcadores para selecionar ovócitos mais competentes. Inicialmente, foi avaliado se a fonte proteica (FP) utilizada durante a maturação in vitro (MIV) afetaria o perfil de expressão de genes candidatos a marcadores nas células do cumulus (CC) e no desenvolvimento embrionário. Complexos-cumulus-ovócitos (CCOs) foram maturados na presença de soro fetal bovino (SFB) ou albumina sérica bovina (BSA), sendo que biopsias de CC foram removidas antes e após a MIV. Os CCOs foram então fecundados e os embriões cultivados na presença de SFB ou BSA. As CCs foram então agrupadas em: CCs de CCOs imaturos e CCs de CCOs maturados que resultaram ou não em embriões. O efeito da FP durante a MIV foi determinado pela quantificação de transcritos dos genes GPC4, VCAN, GHR, PTGS2 e ALCAM. Os resultados mostraram que a FP somente afetou a produção de embriões quando SFB foi usado tanto na MIV quanto no CIV (P<0,05). Além disso, a FP durante a MIV afetou a expressão dos genes VCAN, GHR, PTGS2 e ALCAM nas CCs. O gene GHR foi único que apresentou relação (P<0,05) com a produção de embrião e somente quando o SFB foi usado na MIV. Posteriormente, foram avaliadas características bioquímicas de folículo contendo ovócitos capazes ou não de formar embrião. Folículos de 5-6mm foram dissecados e de cada folículo foram coletados individualmente amostras de líquido folicular (LF), células da granulosa (CG), CC imaturas e maturadas, e os CCOs foram utilizados para a produção de embriões. As amostras foram agrupadas em: CCOs que originaram embrião (EMB) e os que não originaram (NEMB). Nas CC imaturas e maturas e nas CGs foi quantificada, por qPCR, a expressão de 8 genes: CASP3, SERPINE2, VCAN, LUM, FSHR, EGFR, PGR e GHR. No LF foi avaliado DNA livre de células (cfDNA), por quantificação das sequencias de ART2 e BOVTA por qPCR e a concentração de progesterona e estradiol por quimiluminescência e eletroquimioluminescência, respectivamente. Dos 8 genes avaliados, o gene GHR foi mais expresso em CCs imaturas de CCOs do grupo EMB e CASP3 mais expresso nas CC maturas do grupo NEMB (<0,05). Na avaliação do comportamento dos genes durante a MIV, observou-se que houve um aumento da expressão dos genes CASP3 e GHR nesse período apenas no grupo NEMB. Já o gene VCAN aumentou a expressão nas CC do grupo EMB (P<0.05). As análises do LF, mostraram maior quantidade (P<0,05) de cfDNA do gene ART2 no LF do grupo NEMB comparado ao do EMB. Já para o gene BOVTA nenhuma diferença (P>0,05) foi encontrada entre os grupos. A concentração de progesterona no LF foi similar entre os grupos EMB (164,5ng/mL) e NEMB (152,8ng/mL), enquanto a de estradiol foi maior (P<0,05) no grupo EMB (33,14ng/mL) comparado ao grupo NEMB (3,73ng/mL). Quando a relação E2/P4 foi avaliada constatou-se que essa foi maior no grupo EMB (P<0,05). Conclui-se que a FP pode afetar o desenvolvimento embrionário quando o SFB é usado na MIV e CIV, e também influencia a expressão de genes nas CCs gene. Além disso, o maior nível de transcritos de GHR em CC imaturas, a menor expressão de CASP3 em CC maturas, menor nível do gene ART2, a concentração de Estradiol e a relação de E2/P4 no LF podem indicar ovócitos com maior potencial de desenvolvimento.