Marcadores bioquímicos para seleção de embriões bovinos produzidos in vitro

Abstract

A produção in vitro de embriões é uma biotecnologia bem estabelecida tanto na reprodução humana como em animais de produção, porém as taxas de gestação e nascimento após a transferência ainda continuam baixas. Devido a este cenário, existe uma demanda por metodologias que possam selecionar com maior precisão embriões com maior capacidade de estabelecer uma gestação. Portanto, o objetivo do presente estudo foi identificar marcadores bioquímicos para a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro usando diferentes estratégias. A primeira, foi a identificação de marcadores para qualidade embrionária no meio em que os embriões foram cultivados. Para isso, o meio do cultivo dos embriões que geraram ou não prenhez foram comparados quanto ao perfil metabólico pela técnica de espectrometria de massa com ionização em eletrospray (ESI-MS) e quanto a concentração de piruvato, lactato e glutamato, pela técnica de fluorimetria. Os embriões produzidos in vitro foram cultivados em gotas individuais por 48 horas, entre os dias (D) 5 e 7 de cultivo. No D7, o meio foi coletado e armazenado individualmente e os embriões foram transferidos para receptoras. Após o diagnóstico de gestação, o meio foi agrupado em dois grupos: meio do cultivo de embriões que geraram prenhez e o dos que não geraram prenhez. O resultado da espectrometria mostrou uma maior intensidade de sinal no meio do grupo que gerou prenhez comparado ao não prenhe. Na quantificação fluorimétrica foi observada uma maior concentração de piruvato e menor de lactato no meio de cultivo de blastocistos expandidos que geraram prenhez. A segunda estratégia para identificar possíveis biomarcadores de qualidade embrionária foi comparar o perfil metabólico do líquido da blastocele (LB) de blastocistos expandidos (Bx) produzidos in vivo e in vitro. Para isso, os embriões foram produzidos e no D7 do desenvolvimento foram submetidos à micromanipulação para a retirada do LB, que foi analisado por ESI-MS. Os perfis observados neste estudo claramente distinguem os embriões in vivo dos embriões in vitro. Os íons 437,18 m/z e 453,15 m/z detectados no LB dos embriões in vivo e o íon 398,06 m/z no LB dos in vitro são biomarcadores de embriões de diferentes origens com 100% de sensitividade e especificidade. Conclui-se que em ambas as estratégias adotadas neste trabalho foi possível identificar marcadores bioquímicos para qualidade de embriões bovinos.