Estrutura primária e atividade sobre canais KV e CaV do peptídeo TfTx, isolado da peçonha do escorpião Tityus fasciolatus

Abstract

Os escorpiões são aracnídeos bem adaptados e existem há cerca de 400 milhões de anos. A família Buthidae é notável pela importância clínica de suas espécies, que possuem peçonhas neurotóxicos. No Brasil, existem mais de 82 espécies, com destaque para o gênero Tityus. A peçonha desses escorpiões contém vários compostos, como peptídeos, enzimas e sais inorgânicos, com atividades diversas em estudo. Na região central de Brasília, próximo a universidade de Brasília, foram coletados aproximadamente 30 espécimes, entre machos e fêmeas de Tityus fasciolatus. Os animais foram acondicionados vivos no Biotério do Instituto de Biologia da Universidade de Brasília e através do processo de eletroestimulação foram extraídos 46 miligramas de peçonha bruta. O material foi submetido a purificação por HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) em duas etapas para a obtenção de 86,2 µg do peptídeo TfTx puro. A neurotoxina TfTx possui massa molecular de 3.584,64 Da [M+H]+ e sua sequência revelou 31 resíduos de aminoácidos estabilizados por quatro pontes dissulfeto. Nas comparações feitas em bancos de dados, observou-se que esse peptídeo possui alto grau de identidade com peptídeos atuantes em canais de potássio, Bmkk4 isolada da peçonha de Mesobuthus martensii e pMeKTx7 isolada da peçonha de Mesobuthus eupeus, além disso, foi observado um alto grau de identidade com dois outros peptídeos: CllNtx isolado da peçonha de Centruroides limpidus e ‘Peptídeo A’ isolado de Centruroides hirsutipalpus. Este segundo grupo de peptídeos não possui atividade fisiológica descrita e estudos realizados com essas moléculas sugerem que eles compõem uma família ainda não descrita de neurotoxinas com possível atividade em canais de potássio. Este trabalho teve como objetivo principal a elucidação da estrutura primária e a avaliação da atividade da toxina em canais iônicos seletivos para potássio (KV1.4, KV3.1 e hERG1) a concentrações de 500nM e 1µM, e em canais seletivos para cálcio (CaV1.2, CaV1.3, CaV2.1, CaV2.2 e CaV2.3) a uma concentração de 500nM. Porém, não foi observada modificação de corrente ou voltagem significativa para determinar a atividade do peptídeo nestes canais, permanece desconhecido o alvo molecular da toxina.