Expressão de marcadores de poptose e de Foxp3 nas diferentes formas clínicas da Leishmaniose Tegumentar Americana

Abstract

Considerando o papel importante da apoptose e da célula T reguladora (Treg) na modulação da resposta imune, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de proteínas envolvidas na apoptose e a expressão do fator de transcrição Foxp3 (marcador da célula Treg) em amostras de biópsia das diferentes formas clínicas da LTA (leishmaniose tegumentar americana): leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose disseminada (LD), leishmaniose recidiva cútis (LRC), leishmaniose cutâneo-mucosa (LCM) e a leishmaniose cutânea difusa (LCD). Essa expressão foi correlacionada com dados clínico-laboratoriais, alterações histológicas e tipos celulares constituintes do infiltrado inflamatório. Foi avaliada a expressão imunohistoquímica de marcadores para linfócito T (CD45RO, CD4 e CD8), linfócito B (CD20), neutrófilo (CD15), macrófago (CD68), célula de Langerhans (CD1a), dos marcadores da apoptose (Bcl-2, Bak, Bcl-X, FasL, caspase-3 ativa) e do marcador para célula T reguladora (Foxp3) em 95 amostras de biópsias que foram distribuídas de acordo com as formas clínicas apresentadas pelos pacientes: LCL (n=68), LD (n=3), LRC (n=1), LCM (n=16) e LCD (n=7). Células apoptóticas (positivas para caspase-3 ativa) foram identificadas em apenas 49.33% (37/75) das amostras avaliadas. A maior expressão de caspase-3 ativa foi observada na LCL e houve uma correlação positiva entre a expressão de caspase-3 ativa e a expressão de FasL (r=0,49; p=0,0009; n=43) nesta forma clínica. Estes dados sugerem que a via Fas/FasL seja mediadora da apoptose na LTA e importante na evolução clínica das lesões, já que a LCL é a forma clínica caracterizada pela resolução espontânea das lesões. Houve um desequilíbrio na expressão de membros pró e anti-apoptóticos da família Bcl-2 em macrófagos e granulomas epitelioides, que expressaram Bak, mas não Bcl-2 e Bcl-X. Nas formas amastigotas, a expressão de Bcl-X sugere a possível existência de uma proteína, semelhante à Bcl-X encontrada em organismos multicelulares, mas esse achado deve ser investigado por outros métodos. Células Foxp3+ foram observadas apenas em 39.5% (32/81) das amostras avaliadas. A LCD, apesar de apresentar um menor número de células CD4+, mostrou um número significativamente maior de células Foxp3+ quando comparada com a LCL (p<0,03) e estes resultados podem indicar que o maior número de células Treg na LCD possa estar associado com a hiporresponsividade observada nessa forma clínica. Além disso, a correlação positiva (r=0,6185, p=0,0001, n=64) entre a expressão de Foxp3 e caspase-3 ativa observada na LCL e LCM, sugere que a apoptose possa ser um possível mecanismo de ação das células Treg nestas formas clínicas. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Considering the importance of apoptosis and regulatory T cell (Treg) in modulation of the immune response, our aim was to evaluate the expression of apoptosis-related proteins and Foxp3 (marker of regulatory T cell) in lesions of the different clinical forms of ATL (american tegumentary leishmaniasis): localized cutaneous leishmaniasis (LCL), disseminated leishmaniasis (DL), leishmaniasis recidiva cutis (LRC), mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL). To better characterize this expression, we also performed an analysis of histopathological findings and an identification of cell types found in inflammatory infiltrate. We analyzed, by immunohistochemistry, the expression of markers of cell subtypes (CD45RO, CD4, CD8, CD20, CD68, CD15, CD1a), markers of apoptosis (Bcl-2, Bak, Bcl-X, active caspase-3 and FasL) and presence of Foxp3+ cells in 95 biopsy samples that were divided according to the different clinical presentations of ATL: LCL (n=68), MCL (n=16), DCL (n=7), DL (n=3), LRC (n=1). Apoptotic cells (active caspase-3+) were observed in 49.33% (37/75) of the samples and the number of positive cells was low in all clinical forms. Apoptotic (active caspase 3+) cells were more frequent in LCL and a significant positive correlation between the expression of active caspase-3 and FasL was observed in this clinical form. As LCL is the clinical presentation characterized by self-healing evolution, our data suggest the Fas/FasL pathway may be important in clinical evolution of the lesions in ATL. An unbalance in expression of pro-apoptotic and anti-apoptotic members of the Bcl-2 family was observed in vacuolated macrophages and granuloma that expressed Bak but not Bcl-X and Bcl-2. The expression of Bcl-X in amastigote forms suggests a possible existence of counterparts or homologues of the Bcl-X observed in multicellular organisms, but this finding must be investigated by other methods. Foxp3+ cells were observed in 39.5% (32/81) of the samples and the number of positive cells was low in all the clinical forms. DCL (diffuse cutaneous leishmaniasis), even presenting a significantly lower number of CD4+ T cells, showed a higher expression of Foxp3 when compared with LCL and this data suggests that increased number of Treg cells may be associated to the hyporesponsiveness observed in DCL. In LCL and MCL, the number of Foxp3+ cells correlated positively with the number of apoptotic cells (active caspase 3+ cells) indicating that the apoptosis may be a possible mechanism of action of Foxp3+ regulatory T cell in these clinical forms.