Avaliação da acurácia da reação em cadeia de polimerase em tempo real (QPCR) para o diagnóstico da hanseníase no soro de sangue periférico

Abstract

Introdução: A hanseníase é uma doença infecto contagiosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae e pelo Mycobacterium lepromatosis, que atinge principalmente a pele e o sistema nervoso periférico. Configura um problema de saúde pública, com suas manifestações, resultando da interação entre patógeno-hospedeiro. Seu diagnóstico é basicamente clínico, porém exames complementares podem aumentar a acurácia do diagnóstico e resultar em início mais precoce do tratamento e na interrupção da cadeia de transmissão. Metodologia: Trata-se de estudo transversal analítico com objetivo de avaliar a acurácia diagnóstica da reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) para o diagnóstico de hanseníase no soro de sangue periférico. Consiste na identificação da presença de fragmento genético do M. leprae no soro periférico de pacientes imunocompetentes atendidos no ambulatório de hansenologia do HUB de 01/06/2020 a 01/06/2021. Uma quantidade de 1,5ml do soro periférico foi desidratada/concentrada em incubadora e utilizada para análise molecular. Seu resultado foi comparado com o soro não concentrado, chamado de soro normal e esses dados comparados. O alvo escolhido no estudo foi o de sequências repetitivas RLEP. Resultados: Foram incluídos 56 pacientes no estudo, sendo 20 casos e 36 controles. As idades tiveram média de 39,9 anos (DP 17,3) no grupo dos casos e 45,19 anos no dos controles (DP 14,75). A maioria dos pacientes foi diagnosticada com a forma Virchowiana (multibacilar – 50%), seguido das formas dimorfa (30%), tuberculóide (15%) e neural pura (5%). Trabalho anterior utilizou 200µl de soro, enquanto a análise do presente estudo utilizou o conteúdo de até 1500µl, o chamado soro concentrado. Apenas dois pacientes tiveram a positividade do gene RLEP na análise de soro concentrado, gerando sensibilidade de 10% (IC 95% - 2,79-30,10%). A avaliação do soro concentrado demonstrou melhor acurácia, pois a especificidade foi de 100% (IC 95% - 2,79-30,10%), enquanto no soro normal a especificidade ficou em 94,44% (IC 95% - 81,86-98,46%). Na comparação das duas técnicas de análise no soro, o teste de Mcnemar demonstrou que as técnicas não apresentaram diferença estatística (p = 0.633), apesar da melhor especificidade no soro concentrado. Entretanto, a avaliação de concordância pelo método Kappa resultou em 0.3 (IC 95% - 0.05 - 0.55), mostrando que os testes não têm boa concordância. Conclusão: Mesmo com o aprimoramento de técnicas, incluindo a concentração da amostra, o qPCR do RLEP no soro de sangue periférico dos pacientes acometidos mantém baixa sensibilidade, apesar da especificidade elevada. Estes achados sugerem que o qPCR do sangue tem utilidade limitada no diagnóstico laboratorial da hanseníase.