Caracterização molecular de estirpes de ​Salmonella spp. e Listeria monocytogenes ​de biofilmes em ambiente de abatedouros frigoríficos bovinos e de aves localizados no Distrito Federal e estado de Goiás

Abstract

O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de estirpes de Listeria monocytogenes e Salmonella spp. isoladas de biofilmes de ambientes de abatedouros frigoríficos de aves e bovinos localizados no Distrito Federal e estado de Goiás. Objetivou-se caracterizar os isolados de L. monocytogenes através da sorotipificação e através da análise de variabilidade genética pela técnica da PFGE. Para Salmonella spp., objetivou-se realizar caracterização pela análise do WGS. Realizou-se a análise da sequência de fragmentos do gene inlA nos isolados de L. monocytogenes para detecção de PMSCs. Para avaliação do potencial patogênico desses isolados, realizou-se o teste de adesão e invasão em cultivo de células Caco-2, além da detecção de resistência antimicrobiana em todos os isolados através de antibiograma pela técnica de difusão em disco e pesquisa de genes de resistência antimicrobiana por PCR, no caso dos isolados de L. monocytogenes, e WGS, para o isolado de Salmonella spp.. Avaliou-se a capacidade de formação de biofilme dos isolados a 37ºC e 12ºC, com 24 e 168 horas de incubação respectivamente, pelo teste em microplaca de poliestireno. Foram detectados 14 isolados de L. monocytogenes e um (01) isolado de Salmonella spp. em dois dos três abatedouros frigoríficos de aves estudados. Nenhum isolado foi detectado nos dois abatedouros frigoríficos de bovinos. Todos os isolados de L. monocytogenes perteceram à linhagem II (sorotipo 1/2a), e foram observados 11 pulsotipos diferentes. O isolado de Salmonella foi identificado como Salmonella enterica sorovar Ruiru. Não foram detectados PMSCs no sequenciamento do gene da inlA dos isolados de L. monocytogenes, e todos estes isolados foram capazes de aderir em células Caco-2, enquanto 50% deles foram também capazes de invasão das células. Foi detectada resistência antimicrobiana em 57,1% dos isolados de L. monocytogenes, sendo a resistência às sulfonamidas a mais observada. Foram detectados os genes tetC, ermB e tetM, e quatro dos isolados detectados foram classificados com multirresistentes. O isolado de Salmonella spp. apresentou resistência a 9 antimicrobianos e foi classificada como multirresistente, e foram detectados os genes de resistência qnrB19, blaCMY-2, aac(6’)-1aa, sul2 e tetA, além de mutação no gene parC p. T57S. 78,5% dos isolados de L. monocytogenes foram capazes de formação de biofilme a 37ºC/ 24h de incubação e 64,3% foram capazes de formação de biofilme a 12ºC/168h de incubação. Não houve diferença estatística na capacidade de formação de biofilme nas diferentes temperaturas avaliadas. O isolado de Salmonella spp. foi capaz de formar biofilme em ambas as

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temperaturas testadas. A caracterização dos biofilmes, bem como a sua presença nos estabelecimentos abatedouros frigoríficos de aves deste estudo foi confirmada pelas coletas repetidas dos mesmos pontos, e pelo teste de capacidade de formação de biofilme in vitro. Desta forma, estes resultados ressaltam o risco potencial de contaminação cruzada nos ambientes de abatedouros frigoríficos de aves. Os testes de adesão e invasão, aliados à ausência de PMSCs nos isolados de L. monocytogenes, à resistência antimicrobiana e à observação de isolados multirresistentes para os dois microrganismos detectados demonstram o risco potencial para a saúde pública, e destacam a importância da vigilância e manutenção de programas de controle de patógenos dentro da indústria de produção de carnes.