Imitadores sintéticos de miR-7 na potencialização de efeitos in vitro do paclitaxel em células de carcinoma humano de mama e ovário

Abstract

O câncer de mama é a segunda neoplasia maligna mais frequente e a mais comum em mulheres. O câncer epitelial de ovário, apesar de não estar entre as neoplasias malignas mais incidentes, é considerado o câncer ginecológico com maior índice de mortalidade do mundo. O tratamento padrão para esses tipos tumorais é baseado em terapias combinadas com uso de taxanos como o paclitaxel que, apesar de amplamente utilizado, pode causar efeitos adversos que afetam a qualidade de vida do paciente, bem como perder efetividade face à resistência das células tumorais, fatores que comprometem a terapêutica da doença. Estudos baseados em RNA de interferência (RNAi) mostram que microRNAs são alvos promissores para o tratamento do câncer devido à sua capacidade de controlar pós-transcricionalmente a expressão gênica de mensagens importantes para a carcinogênese. Neste sentido, miR-7 se destaca como supressor tumoral em diversos tipos de cânceres e a sua baixa expressão está relacionada com a alta atividade de genes envolvidos em vias de sinalização, proliferação celular e metástase. Assim, a reposição do conteúdo deste microRNA em células cancerosas, por meio de imitadores sintéticos, representa uma nova abordagem terapêutica da doença. No presente estudo, objetivou-se dar continuidade aos trabalhos do grupo sobre a capacidade do imitador sintético de miR7 (miR-7 mimics) em sensibilizar células para os efeitos do paclitaxel. Foram estudadas células de tumor mamário triplo-negativo MDA-MB-231 e de tumor epitelial de ovário A2780. A viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico de MTT e a análise morfológica por meio de microscopia óptica e de fluorescência. O tipo de morte celular foi analisado por citometria de fluxo por marcação de Anexina-V/PI. Espécies reativas de oxigênio foram quantificadas por DCFH-DA e CellROX Green Reagent. A associação simultânea entre paclitaxel (100nM) e miR-7 mimic (10nM) (PTX+miR-7) induziu efetiva redução na viabilidade celular das duas linhagens estudadas, comparativamente ao uso isolado do paclitaxel. Na linhagem MDA-MB-231 o tratamento PTX+miR-7 causou alterações morfológicas significativas na superfície das membranas plasmáticas, com aspecto mais rugoso/esponjoso, sugerindo perda de estabilidade das mesmas. Na linhagem A2780 a associação de paclitaxel a miR-7 resultou em alterações morfológicas semelhantes às vistas com o PTX isolado, havendo ainda redução do número de células e menor quantidade de células aderidas ao poço. Nas duas linhagens estudadas foi possível observar aumento do volume e fragmentação do núcleo da célula. A terapia combinada (PTX+miR-7) elevou majoritariamente o percentual de morte celular por apoptose em ambas as linhagens celulares, quando comparada ao quimioterápico isolado (PTX). Os dados mostram que a apoptose por miR-7 mimics é acompanhada de aumento significativo no estresse oxidativo (ROS) das células tumorais de mama MDA-MB-231. De forma oposta, os resultados sugerem que o mecanismo de miR-7 mimic para potencializar a citotoxicidade do paclitaxel não está relacionado ao aumento significativo de estresse oxidativo nas células tumorais de ovário A2780. Os resultados do presente estudo permitem concluir que o uso de imitador sintético de miR-7 em associação a paclitaxel representa abordagem promissora na terapêutica dos cânceres de mama triplonegativos e de ovário, colocando-se em perspectiva testes pré-clínicos para análise de eficácia e segurança.