Estudo comparativo da associação entre o peptídeo de defesa do hospedeiro IDR1002 e ciprofloxacino em culturas de células pulpares humanas

Abstract

O avanço da biotecnologia tem proporcionado significantes mudanças no âmbito da engenharia tecidual e com isso terapias regenerativas como a revascularização pulpar vem ganhando espaço na endodontia no tratamento de dentes permanentes imaturos. Porém, o uso das pastas antibióticas difundidas para técnica de revascularização e a imprevisibilidade da concentração de células tronco aprisionadas no coágulo sanguíneo podem afetar o processo de neoformação tecidual. Diante disto, novos protocolos têm sido estudados para aprimoramento da técnica. Por outro lado, os peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) podem apresentar atividade antimicrobiana, imunomodulatória e regenerativa, surgindo como uma opção para a revascularização pulpar, podendo atuar de forma isolada ou em combinação com outras biomoléculas. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar a resposta das células pulpares na presença da associação sinérgica composta por um peptídeo de defesa do hospedeiro, o IDR-1002 e o antibiótico ciprofloxacino, um dos componentes da pasta duplo antibiótica (DAP), atualmente utilizada nos protocolos de revascularização pulpar. Para tanto, foi analisado inicialmente o perfil fenotípico das células presentes no ambiente apical do elemento dental – células da polpa, células do ligamento periodontal e células da papila apical, por citometria de fluxo. Em sequência, foi avaliado a migração e proliferação das células pulpares na presença da associação entre o peptídeo e o antibiótico. Para avaliação da produção de citocinas, diversas situações experimentais foram estabelecidas: condições clássicas de resposta a infecção (na presença de LPS) e de resposta imunoinflamatória (na presença de LPS com IFN-), assim como situações de resposta a infecção antígeno específica (na presença de HK-E. faecalis e HK-S. aureus). Nestas situações, a citotoxicidade e a produção de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias das células pulpares foram analisadas. A citotoxicidade foi avaliada pelo método de MTT e a expressão de citocinas, por qPCR. O perfil fenotípico demonstrou marcação superior a 97% para os marcadores positivos para células-tronco mesenquimais (CTMs) e inferior à 1%, para o coquetel de marcadores negativos para células pulpares, as quais foram eleitas para serem utilizadas nos experimentos seguintes. As células pulpares apresentaram aumento na capacidade migratória e proliferativa nos grupos expostos ao peptídeo IDR-1002 e à combinação sinérgica após 24 e 48h. Após 24h, observou-se ausência de citotoxicidade em todas as situações propostas e na presença de todos os grupos experimentais. A avaliação das citocinas, após 24h, demonstrou que a presença da associação sinérgica levou a redução significativa da expressão dos genes

TNFRSF-1, IL-1β, IL-8 IL-6 e IL-10. Em suma, a associação sinérgica entre o peptídeo IDR- 1002 e o ciprofloxacino apresentou potencial imunomodulatório favorável, surgindo como uma

opção promissora para os processos de revascularização pulpar.