Desenvolvimento de sistema baseado na produção de GFP dependente de densidade celular para a detecção e triagem funcional de genes com atividade antibacteriana

Abstract

Vários estudos demonstram que a clonagem e expressão de enzimas e compostos bioativos utilizando a abordagem metagenômica é uma ótima alternativa para a exploração funcional de microrganismos ainda não cultiváveis. A detecção de clones com atividade antimicrobiana pode ser realizada atualmente por meio de visualização direta por alteração fenotípica do clone, como pigmentação e morfologia da colônia ou formação de halo de inibição quando realizado ensaios de sobreposição contra microrganismos indicadores. Essas estratégias já identificaram clones metagenômicos com atividade antimicrobiana, mas demonstraram, mesmo utilizando diversos hospedeiros, baixa resolução e sensibilidade, indicando a necessidade de métodos de triagem mais robustos para limites inferiores de detecção. Neste estudo é relatado o desenvolvimento de um sistema de detecção de atividade antibacteriana baseado na produção de fluorescência, por meio da expressão do gene gfp, decorrente à ativação por moléculas homoserina lactonas (HSL), que estão diretamente relacionadas à densidade celular da bactéria produtora utilizada no ensaio antibacteriano. Essa metodologia, denominada CEDDEX, apresentou sensibilidade significantemente superior quando comparada aos métodos tradicionais de triagem, além de poder ser executada de maneira relativamente simples em um curto período de dias e com um baixo custo operacional.