Escalonamento de produção da proteína rhPDGF-BB em células HEK293T : adaptação e crescimento celular

Abstract

O PDGF-BB é a forma homodimérica do fator derivado de plaquetas, é uma proteína responsável pela cascata de coagulação sanguínea, com alto poder mitogênico e angiogênico. Esta proteína pode ser utilizada em terapias de crescimento capilar e reparo de tecidos, devido sua capacidade de atrair, recrutar e proliferar diferentes tipos celulares necessários para o processo de remodelação da matriz proteica. Dentre as possíveis aplicações está o tratamento de neuropatia diabética, uma complicação do diabetes, que consiste na formação de feridas ou úlceras nas regiões periféricas – pés - do paciente e que podem gerar amputações não traumáticas. O tratamento com os fármacos disponíveis no mercado contendo PDGF-BB possuem altos custos, que impossibilita sua disponibilidade aos pacientes e até mesmo sua redistribuição pelo SUS. Neste trabalho, o intuito foi avaliar e acompanhar o crescimento celular de HEK293T superprodutoras de rhPDGF-BB adaptando-as ao crescimento em suspensão aderido à superfícies em microcarreadores em dois aumentos de escala: sistema FibraStage e frasco tipo spinner de 100mL visando o escalonamento da produção da proteína. A avaliação do perfil metabólico dos meios condicionados foi realizado por colorimetria e HPLC. Obteve-se um perfil não linear durante as horas de cultivo em ambos aumentos de escala. Os resultados mostraram que o perfil metabólico das células no FibraStage variou conforme a concentração de glicose no meio e regulou a produção de lactato e glutamina durante a batelada. Para o ensaio em spinner após 5 dias de adaptação celular ao sistema e fase lag de 10 dias, as células atingiram a fase exponencial. Os testes realizados com os microcarreadores mostraram que a medida que as horas de cultivo aumentaram, a integridade física dos carreadores foi comprometida, porém não impediu a proliferação das células em sua superfície. Assim, os resultados mostraram-se promissores para a utilização em um novo aumento de escala e volume de trabalho compatível com biorreator tipo Wave.