Interação Trypanosoma cruzi e hospedeiro : influência do parasita na expressão da subunidade β1i do imunoproteassoma

Abstract

A Doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma doença causada pelo parasita protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e é considerada endêmica em 21 países da América Latina. Estudos mostraram que a infecção por T. cruzi interfere na expressão em nível pós-transcricional de proteínas da via de apresentação MHC classe I, especificamente as subunidades induzíveis do imunoproteassoma (β1i, β2i e β5i), a subunidade PA28α, a proteína TAP e o MHC I. O presente estudo teve como objetivo avaliar se as regiões 5’ e 3’ UTR dos mRNAs dessas proteínas estão envolvidas na inibição da expressão no nível traducional pelo parasita, utilizando como modelo a subunidade β1i do imunoproteassoma. Para isso, essas duas regiões foram amplificadas e clonadas flanqueando o gene repórter EGFP em um vetor de expressão para células eucarióticas. Células transfectadas foram infectadas com T. cruzi e após quatro dias foram realizadas citometria de fluxo e microscopia de fluorescência para analisar a expressão da EGFP. Foi possível observar que as células HeLa transfectadas com a montagem do gene EGFP contendo as regiões 5’UTR e 3’UTR da subunidade B1i e infectadas com o parasita apresentaram queda na expressão da EGFP em sua população. Em uma visão mais individualizada por microscopia foi observado que células que apresentavam uma parasitemia elevada não emitiam fluorescência, ou apresentavam menor intensidade que as células na mesma população não infectadas. Nas células transfectadas com o gene EGFP sem as regiões UTRs observamos que a presença dos parasitas no interior das células não interferiu na expressão da EGFP. Esses resultados indicam que há uma interferência na expressão da subunidade β1i do imunoproteassoma durante a infecção por T. cruzi e que as regiões UTR são alvos nesse processo de inibição pós-transcricional.