Efeitos de agentes desidratantes sobre fibras de cromatina e cromatossoma reconstituídos in vitro

Abstract

O DNA em seres eucarióticos é organizado na forma de cromatina, sendo esta a principal responsável pela regulação de diversas atividades vitais para célula, como a transcrição e manutenção do genoma. A cromatina é um complexo formado por unidades repetitivas de nucleossomos e pode se apresentar na forma aberta (10nm-permissiva) ou fechada (30nm- repressiva). Está evidente que a dinâmica de modulação da estrutura da cromatina determina a resposta transcricional e consequentemente o desfecho clínico. Desta forma, com objetivo de se analisar a dinâmica da cromatina, (i) procuramos estabelecer o desenvolvimento de uma metodologia in vitro para o estudo estrutural da cromatina. Em seguida, (ii) objetivamos estudar a ação do etanol, um agente desidratante, sobre a formação do mononucleossomo e de longas fibras de cromatina reconstituídos in vitro e (iii) estabelecer a concentração ideal de colesterol para induzir a formação do cromatossomo, complexo nucleossomo e linker histona (H5). Observamos, por ensaios bioquímicos que o etanol aumenta a estabilidade do mononucleossomo e auxilia a formação de fibras de cromatina de 10nm. Contudo, não observamos nenhum efeito do etanol sobre a formação da fibra de 30nm reconstituída in vitro. Além disso, determinamos a concentração mínima e máxima de colesterol capaz de induzir a formação do cromatossomo. Esses resultados sugerem que o etanol e colesterol possam auxiliar os estudos estruturais da cromatina reconstituída in vitro e que a desidratação da cromatina, através destes agentes, possa afetar a dinâmica da cromatina. Ainda desconhecemos os efeitos fisiológicos destes achados, mas nossos resultados apontam para um novo campo de pesquisa ainda inexplorado, onde pequenas moléculas ligantes de nucleosssomo afetam a estrutura da cromatina.