Avanços no isolamento e caracterização biológica e molecular de acanthamoeba spp (Acanthamoebidae) – ameba de vida livre : determinação experimental do potencial patogênico

Abstract

Várias espécies do gênero Acanthamoeba podem causar ceratite e encefalite amebiana granulomatosa. A avaliação dos critérios de patogenicidade é de grande importância para analisar o risco de infecção. Nossos objetivos foram determinar o potencial patogênico de isolados ambientais de Acanthamoeba de Brasília, DF e avaliar uma técnica de purificação de cultivos de Acanthamoeba. A análise da sequência do 18S rDNA revelou que: entre os 19 isolados estudados, oitoapresentaram similaridade com o genótipo T5, seis com o genótipo T4 e um com o genótipo T2/T6. Os genótipos dos outros quatro isolados não foram determinados. A cepa de referência Acanthamoeba polyphaga (ATCC 30461) serviu de controle. Além disso, 11 isolados (58%) cresceram a 37°C e oito (42%) cresceram em presença de manitol 1,5 M, parâmetros fisiológicos associados com isolados patogênicos de Acanthamoeba, enquanto quatro isolados de água de piscina e um de ceratite apresentaram elevado potencial patogênico. Nos testes de patogenicidade in vivo, realizados com três isolados e a cepa de referência ATCC30461, o isolado de córnea foi considerado patogênico e dois isolados ambientais,invasivos. Foi possível reduzir a porcentagem de fungos e bactérias em uma placa de cultura da cepa de referência ATCC 30461 e de bactérias em uma placa de cultura de um isolado de solo com a inoculação na cavidade peritoneal de camundongos. Nossos resultados indicam ampla distribuição de isolados de Acanthamoeba spp. similares aos genótipos T4, T5 e T2/T6, classificados como invasivos, em diversos habitats de Brasília, DF, revelando o risco potencial de infecção humana e a necessidade de medidas preventivas. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Several Acanthamoeba species may cause keratitis and granulomatous amebic encephalitis. The evaluation of the criteria of pathogen city is very important to assess the risk of infection. We aimed to determine the pathogenic potential of environ mental isolates of Acanthamoeba from Brasília, DF, Brazil, and assess technique to purify Acanthamoeba cultures. Sequence analysis of 18S rDNArevealed that: among the 19 isolates tested, eight were similar to genotype T5, six to genotype T4, and one to genotype T2/T6. The genotypes of the remaining four isolates were not determined. The reference Acanthamoeba polyphaga strain (ATCC30461) was the control. Moreover, 11 strains (58%) presented growth at 37°C and eight (42%) developed in medium containing 1.5 M mannitol, the physiological parameters associated with pathogenic isolates of Acanthamoeba, whereas fours trains isolated from swimming pool water and one from a patient with keratitisshowed high pathogenic potential. In vivo pathogen city tests, performed with three isolates and the reference strain ATCC 30461, showed that the isolate from a patient with keratitis was considered pathogenic and two environmental isolates, invasive. It was possible to reduce the percentage of fungi and bacteria in a culture plate of the reference strain ATCC 30461 and bacteria in a culture plate of one soil isolate byinoculating them into the peritoneal cavity of mice. Our results indicate a wide distribution of Acanthamoeba spp. isolates similar to genotypes T4, T5, and T2/T6, classified as invasive, isolated from several habitats of Brasília, DF, revealing the potential risk of human infection and the need for preventive measures.