Desenvolvimento de nanoemulsões de óleo de pequi (Caryocar brasiliense) obtido por diferentes métodos de extração e avaliação de seus efeitos sobre a atividade de macrófagos RAW 264.7 in vitro

Abstract

A inflamação é um dos processos de defesa do corpo e ocorre em resposta a infecções causadas por microrganismos ou danos nos tecidos. O óleo de pequi extraído de Caryocar brasiliense, encontrado na região do Cerrado, é popularmente utilizado por suas propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes devido à presença de ácidos graxos e carotenoides. A nanotecnologia serve como uma ferramenta para superar barreiras na administração de compostos hidrofóbicos. Este estudo teve como objetivo realizar o desenvolvimento de nanoemulsões de óleo de pequi (Caryocar brasiliense) obtido por diferentes métodos de extração (prensagem a frio, solvente e fervura) e a avaliação de seus efeitos sobre a atividade de macrófagos RAW 264.7 in vitro. Os óleos de pequi foram avaliados com base em seu perfil lipídico, acidez e valores de peróxidos para garantir sua qualidade após os processos de extração. As nanoemulsões foram formuladas com óleo de pequi obtidos pelos métodos de extração por solvente (NeS), prensagem à frio (NePF) e fervura (NeF), lecitina de ovo (2:1 p/p) e estearato de polioxietileno 40 (2%) e dispersas em PBS por ultrasonicação em banho de gelo. As amostras foram avaliadas por Dynamic light scattering (DLS) por 120 dias a 4 °C e 25 °C para avaliar sua estabilidade, além de pH e condições de estresse (diluição seriada de 0 a 1/128 e variação de pH entre 3-11). Para os ensaios de citotoxicidade, macrófagos RAW 264.7 foram tratados com diferentes nanoemulsões por 24 horas e tiveram sua viabilidade analisada pelo ensaio MTT. A produção de citocinas de macrófagos tratados com as nanoformulações por 24 horas, e estimulados ou não por LPS (lipopolissacarídeo bacteriano), foram determinadas pelo ensaio de ELISA. Os óleos de pequi mantiveram níveis aceitáveis de acordo com os índices de acidez (mg KOH·g−1): OS = 4,59 OPF = 3,48 e OF = 1,1 e de peroxidação (mEq·kg−1): OS = 3,21 OPF = 2,87 e OF = 2,65. As nanoemulsões à base de óleo de pequi apresentaram diâmetro hidrodinâmico semelhante <100 nm, PDI <0,250, potencial zeta entre -1,5 e -2,5 mV, pH entre 6 e 7, e permaneceram estáveis durante o teste de diluição sem variação significativa. Os testes de variação de pH mostraram mudanças no potencial zeta no pH mais ácido, as nanoemulsões permaneceram neutras (3) perto de 0 mV, e no pH mais básico (11) ficaram negativas (aproximadamente -10 a -15 mV). O ensaio de MTT indicou que a concentração de 360 µg/mL de diferentes nanoemulsões e óleos livres não apresentou citotoxicidade significativa às células após 24 horas, com viabilidade celular >80%. Nos ensaios de ELISA, para o grupo IL-10 estimulados com LPS, todos os tratamentos apresentaram produção da citocina, porém sem diferença significativa comparada ao controle PBS. No grupo IL-6 com LPS, apenas os tratamentos NePF, OF e NeF apresentaram produção, porém a ausência de produção de IL-6 no controle PBS indica necessidade de um novo ensaio para comparação dos tratamentos. No grupo IL-12 com LPS, os tratamentos NeF e NBR apresentaram baixa produção da citocina IL-12, sugestivo de possível modulação anti-inflamatória presente nesses tratamentos. As nanoemulsões formuladas a partir de óleo de pequi obtido por diferentes métodos de extração permaneceram estáveis, e os métodos de extração não levaram a diferenças entre as amostras nos parâmetros avaliados. Os resultados de citotoxicidade e os dados preliminares dos ensaios de ELISA sugerem potencial na utilização das nanoemulsões à base de óleo de pequi em processos inflamatórios, sendo necessários estudos posteriores para avaliação pormenorizada desta ação.