Desenvolvimento e validação de um método analítico usando UHPLC-DAD para a determinação de N-benzilfenetilamina substituída

Abstract

As N-benzilfenetilaminas substituídas, como os 25R-NBOMe e 25R-NBOH (R = Br, Cl, H, I e etil), são potentes agonistas do receptor serotoninérgico (5-HT2A) detectados em selos apreendidos em todo o mundo. Nos laboratórios forenses, essas substâncias são analisadas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS) e cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem (HPLC-MS/MS). Nesses laboratórios é essencial desenvolver um método que seja mais rápido, simples e sensível para a identificação e quantificação de 25R-NBOH, por se tratar de um composto termicamente lábil. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um novo método em UHPLC-DAD para identificar e quantificar 25R-NBOH em selos. A análise foi realizada em modo isocrático, utilizando para a separação um cromatógrafo líquido Agilent 1290 acoplado a um detector de arranjo de diodos (UHPLC-DAD). A fase móvel consistiu de acetonitrila/tampão fosfato 0,1 M (pH 2,3), na proporção de 37:63. O método foi validado em uma faixa de concentração de 200 ng/mL a 25.000 ng/mL. Apresentou desvio padrão relativo precisão e exatidão intra e interensaio < 6%. Desenvolveu-se uma biblioteca contendo espectros de UV e tempo de retenção relativo para os compostos LSD, 25R-NBOH, 25R-NBOMe e 2C-R. Avaliou-se o método proposto analisando 158 amostras reais e a concentração média por selo foi determinada para 25C-NBOH (237 ± 234 µg, n = 49), 25B-NBOH (900 ± 451 µg, n = 33), 25E-NBOH (819 ± 375 µg, n = 37) e 25I-NBOH (861 ± 383 µg, n = 28). Ensaios de estabilidade para as amostras de 25R NBOH e 25R-NBOMe foram preparados com metanol e água: acetonitrila (1:1). Estas análises indicaram que, após 50 dias de armazenamento, à temperatura ambiente e sem a exposição de luz, os selos apreendidos não sofreram degradação, a qual foi caracterizada pela formação do fragmento 2C-R (degradação), já em temperaturas de 50 ºC foi observada a degradação do 25R-NBOH. Este estudo é o primeiro a analisar essas substâncias utilizando UHPLC-DAD, apresentando-se como um método, para análise de 25R-NBOH em selos, mais simples e rápido do que os estudos publicados anteriormente.