Investigação do potencial adipogênico dos agrotóxicos ametrina e carbosulfano em cultura de células de mamíferos

Abstract

O Brasil é um dos maiores consumidores de agrotóxicos do mundo. Trabalhos recentes mostram que essas substâncias podem atuar como desreguladores endócrinos, causando efeitos adversos no organismo, entre eles, a adipogênese, que pode levar ao ganho de peso e contribuir para o desenvolvimento da obesidade. Estudos recentes, não publicados, do grupo de pesquisa ao qual faço parte identificaram que os agrotóxicos ametrina e carbosulfano apresentam efeito adipogênico em células 3T3-L1 e o carbosulfano promove ativação doPPARγ, regulador chave da adipogênese. Levando em consideração estes resultados e os poucos conhecimentos sobre o efeito desregulador endócrinodos agrotóxicos, estudos que investiguem esse tema são de extrema relevância.Esse trabalho objetivou investigar, em cultura de células de mamíferos, outros mecanismos que podem estar relacionados ao potencial adipogênico promovido pelos agrotóxicos ametrina e carbosulfano. Considerando os resultados obtidos anteriormente, foi realizado o ensaio de transfecção e gene repórter utilizando células HeLa para avaliar se a cisteína 285 era importante para a ativação do PPARγ promovida pelo carbosulfano e para avaliar se os agrotóxicos promoveriam ativação do GRα, PPARα e β, TRα e β e PXR. Para avaliar se o acúmulo lipídico promovido pelos agrotóxicos ocorria via PPARγ, foi realizado o ensaio de diferenciação celular, durante 15 dias, com células 3T3-L1 tratadascom os agrotóxicos nas concentrações que promoveram acúmulo lipídico, na presença ou ausência de T0070907, antagonista específico de PPARγ . Por fim, foi realizado ensaio de RT-qPCR para comparar a expressão de genes inflamatórios em células 3T3-L1 tratadas com ametrina ou com rosiglitazona, um agonista já conhecido de PPARγ que tem propriedades anti-inflamatórias. Como resultados, a presença da mutação na cisteína 285 aboliu a atividade transcricional promovida pelo carbosulfano, sugerindo que a cisteína é essencial para sua ativação e que o carbosulfano pode mimetizar ligantes endógenos. Com relação aos receptores investigados, nenhum dos agrotóxicos promoveu ativação de GRα, PPARα e β e TRα e β. Contudo, o carbosulfano promoveu ativação do PXR, podendo ser considerado seu agonista parcial. No ensaio de diferenciação celular com antagonista, observou-se que o co-tratamento reduziu o acúmulo lipídico promovido pelos agrotóxicos testados, sugerindo que esse acúmulo ocorre via PPARγ. Com relação a expressão de genes inflamatórios, a ametrina diminuiu a expressão dos mesmos, sendo que, em sua maior concentração, a diminuição foi semelhante a promovida pela rosiglitazona, mas vale ressaltar que foi necessária uma concentração maior de ametrina para promover esse feito. Os resultados desse trabalho permitem maior conhecimento sobre alguns agrotóxicos utilizados no Brasil, porém mais estudos são necessários para compreensão dos seus efeitos em organismos complexos.