Efeito de agonistas de PPARγ sobre a expressão de genes inflamatórios e adipogênicos em sistema de cocultura macrófagos-adipócitos

Abstract

Introdução: a obesidade é uma doença crônica que já afeta boa parte da população mundial. O aumento de sua incidência causa consequentemente o aumento de doenças a ela relacionadas, como hipertensão e DM2. O desbalanço do tecido adiposo e a inflamação – resultante também da infiltração de macrófagos – foram identificados como os principais causadores desses distúrbios. Já foi demonstrado o papel crucial que o PPARγ possui tanto na diferenciação de adipócitos quanto na regulação de genes inflamatórios em macrófagos. Estudos prévios indicaram que o GQ-16, agonista parcial de PPARγ, apresenta efeitos sensibilizador insulínico comparáveis aos do agonista total rosiglitazona, porém sem indução de ganho de peso. Objetivo: Estudar os efeitos anti-inflamatórios e adipogênicos do agonista total e parcial do PPARγ, rosiglitazona e GQ-16, respectivamente, sobre as respostas inflamatória e adipogênica em dois tipos de sistema de cocultura de macrófagos-adipócitos. Métodos: linhagem de macrófagos murinos RAW 264.7 e de pré-adipócitos 3T3-L1 maduros foram cultivados e realizado sistema de cocultura por contato e transwell com posterior tratamento de 24 horas com veículo (DMSO 0,01%), rosiglitazona (10-5M) e GQ-16 (10-5M), na presença e ausência de estímulo inflamatório com LPS (100 ng/mL). Como controle foram utilizadas células 3T3-L1 diferenciados e RAW 264.7 cultivados separadamente, os quais receberam os mesmos tratamentos da cocultura. As células foram coletadas com Trizol e aexpressão relativa do RNAm dos genes inflamatórios e adipogênicos foi analisada por PCR quantitativa em tempo real (RT-PCRq). Resultados: na cocultura por contato, o LPS aumentou a expressão do RNAm da Il6 e esse efeito foi revertidopela rosiglitazona quando os macrófagos foram pré-tratados com o LPS. O mesmo não foi visto na expressão do RNAm do Tnfα. Na maioria dos tratamentos, a expressão do RNAm dos dois genes foi mais acentuada na cocultura do que quando as células foram cultivadas separadamente. Em relação aos genes adipogênicos, o LPS foi capaz de aumentar a expressão do RNAm apenas da Fabp4 e do Glut4, na cocultura por contato. Esse estímulo ainda foi intensificado pela rosiglitazona na expressão do RNAm da Fabp4, quando anteriormente os macrófagos foram expostos ao LPS. Apenas houve diferença estatisticamente significativa na expressão do RNAm da Adpn no tratamento com GQ+LPS do experimento-controle, em que ocorreu aumento da expressão do gene em relação ao LPS. Os três genes adipogênicos, na maior parte dos tratamentos, tiveram o RNAm menos expresso na cocultura por contato do que no controle. Na cocultura transwell, o LPS aumentou a expressão do RNAm apenas da Il6 e da Adpn, e a rosiglitazona, diminuiu e aumentou, respectivamente, esse efeito quando os macrófagos foram pré-tratados com LPS. Conclusão: a interação entre macrófagos e adipócitos parece possuir papel fundamental na regulação da expressão de genes inflamatórios e adipogênicos. O efeito anti-inflamatório da rosiglitazona foi confirmado e o GQ-16 mostrou possuir menor efeito adipogênico em relação ao agonista total de PPARγ.