Criopreservação de calos e respostas à indução da embriogênese somática e à regeneração de plantas em multiplos acessos de cacaueiro (Theobroma cacao L.)

Abstract

O Brasil abriga um dos maiores Bancos de Germoplasma de cacaueiro do mundo, com mais de 4.500 acessos conservados em campo. No entanto, esses acessos estão ameaçados por condições ambientais adversas. Este estudo teve como um dos objetivos avaliar estratégias de conservação ex situ de cacaueiros por meio da criopreservação de calos a partir de diferentes acessos, tipos de explantes e métodos de criopreservação. Num segundo momento, o trabalho se propôs a avaliar o efeito genotípico de 24 genótipos de cacaueiros quanto a indução da embriogênese somática e regeneração de plantas. No primeiro experimento, acessos comerciais (CCN-51, CEPEC 2002 e PH 16) e não comerciais (752 e 762) foram estudados, utilizando explantes de estaminódios inteiros e a parte basal dos estaminódios. Analisaram-se pré-tratamentos de criopreservação, como pré-cultivo em sacarose e tempos de imersão em soluções de vitrificação (PVS2) e técnicas como vitrificação, droplet vitrification e slow cooling. O potencial embriogênico e reações adversas também foram avaliados. Os resultados mostraram que, no pré-cultivo em sacarose, os genótipos comerciais apresentaram altas taxas de sobrevivência de calos, com destaque para CCN-51 e CEPEC 2002, que atingiram 100%. Na imersão em loading solution, o genótipo 752 obteve 100% de formação de calos em tempos de imersão mais longos. Nos experimentos de imersão em PVS2 e nitrogênio líquido (NL), observou-se uma redução significativa na viabilidade de calos, especialmente em explantes oriundos de partes basais. Na droplet vitrification, foram encontrados mais calos com células embriogênicas, embora houvesse a presença de oxidação em grande parte das amostras. No segundo experimento, foram avaliados 24 genótipos quanto à embriogênese somática. A análise fenotípica revelou variações de coloração nos botões florais e estaminódios. A formação de calos variou significativamente entre os genótipos, com destaque para aqueles que apresentaram calos granulares e nodulares. Após 35 dias, observou-se formação de embriões somáticos, que se desenvolveram principalmente na base dos estaminódios. O genótipo 4025 M153 se destacou com 330 embriões formados, porém, muitos embriões apresentaram má formação, necessitando de ajustes nos protocolos. Conclui-se que a criopreservação em ultrabaixas temperaturas manteve a viabilidade dos calos, mas futuras otimizações são necessárias. A embriogênese somática também revelou variações genotípicas, sugerindo que ajustes nos protocolos podem melhorar a regeneração de plantas completas.