Identificação, clonagem e seqüenciamento de proteína quinases na saliva de Triatoma infestans

Abstract

Os triatomíneos são insetos hematófagos transmissores da doença de Chagas ao homem. Durante a picada, injetam saliva que contém moléculas com ações fisiológicas diversas. O estudo destas moléculas tem ajudado a elucidar como os insetos inibem mecanismos de defesa do hospedeiro em seu favor. Além disso, a caracterização dos componentes salivares pode produzir conhecimento útil para produção de novas drogas. Encontrou-se recentemente evidências de que existem quinases na saliva de Triatomíneos. Neste estudo,foram identificadas e seqüenciadas regiões codificadoras de arginina quinase(AK) e nucleosídeo difosfato quinase da glândula salivar de Triatoma infestans.A AK foi clonada, expressa em bactéria e utilizada em imunização para produção de anticorpos específicos. Ensaios de Western blot permitiramconfirmar a presença de AK na saliva de T. infestans, Panstrongylus megistuse Rhodnius neglectus, na forma de dímeros. Em contrapartida, identificou-se AK monomérica na glândula salivar. A enzima tem potencial alergênico que pode contribuir para reações de hipersensibilidade causada pela picada de triatomíneos. Ainda não se sabe se a AK exerce papel funcional na hematofagia, mas a diferença entre a proteína citosólica e secretada indica que pode haver valor adaptativo para os dímeros de AK salivar. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Triatomines are haematophagous insects that transmit Chagas’ disease tohuman populations. During blood feeding, they inject saliva composed of physiologically active molecules. The research of saliva’s molecules provided better understanding of insect’s adaptations to inhibit host’s defenses mechanisms. Besides, molecular characterization may provide useful knowledge to new drugs development. Recent evidences indicated the possibility that kinases could be secreted by triatomine’s salivary glands. This research identified and sequenced coding regions of arginine kinase (AK) and nucleoside diphosphate kinase from salivary glands of Triatoma infestans. AKwas cloned, expressed on bacteria and used in immunizations to specificantibody production. Through western blot assays we confirmed dimeric AKsecretion in saliva of T. infestans, Panstrongylus megistus and Rhodniusneglectus. However, monomeric AK was identified on the salivary glands. Theenzyme is a potential allergenic that could contribute to hypersensibility reactions associated to triatomines’ bites. Although the role of AK inhaematophagy is still unknown, the difference observed between the cytosolicand secreted AKs indicates that the dimeric AK in saliva may have an adaptive value to the bug.