Análise proteômica das salivas dos triatomíneos Rhodnuis brethesi, Rhodnius robustus e Panstrongylus megistus, vetores da doença de Chagas

Abstract

Triatomíneos vetores da doença de Chagas são organismos hematófagos durante todas as fases de seu desenvolvimento. O sucesso de seu repasto se deve, em grande parte, ao conteúdo de suas glândulas salivares. Especialmente o conjunto de proteínas secretadas lhes proporciona ter acesso ao seu alimento contrapondo mecanismos hemostáticos do organismo alvo, como a agregação plaquetária, coagulação sanguínea e vasoconstrição, como também processos inflamatórios. Tendo em vista a relevância desses componentes no controle da transmissão do Trypanosoma cruzi, as salivas de espécies de triatomíneos importantes na epidemiologia dessa enfermidade no Brasil, Panstrongylus megistus no Cerrado e Mata Atlântica, e Rhodnius brethesi e Rhodnius robustus na Amazônia, foram coletadas e submetidas a estudos de caracterização proteômica. Inicialmente foram otimizadas as condições experimentais de separação por eletroforese bidimensional (2DE) em faixas amplas de pH. O número de spots nas salivas analisadas variou entre 129 e 320. As análises comparativas dos mapas bidimensionais de cada saliva revelam perfis de expressão diferentes entre gêneros. A identificação de spots proteicos obtidos a partir desses mapas foi feita por peptide mass fingerprinting, fragmentação de peptídeos e sequenciamento de novo utilizando espectrômetros de massas do tipo MALDI-TOF/TOF. Perfis predominantemente anti-hemostáticos foram observados nas salivas do gênero Rhodnius, mostrando principalmente proteínas com potencial anti-agregação plaquetária como as lipocalinas. A análise proteômica da saliva de Panstrongylus megistus está em andamento, e os primeiros resultados sugerem a presença de proteínas potencialmente anti-agregadoras plaquetária. Os proteomas salivares desses vetores triatomíneos mostraram-se ricos em inibidores da agregação plaquetária que promovem o repasto sanguíneo desses insetos. Análises posteriores destes e novos spots poderão proporcionar melhor compreensão da interação vetor-hospedeiro, além de possibilitar a descoberta de novas moléculas de importância farmacológica para uso terapêutico contra hemopatias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Triatomine bugs acting as vectors of Chagas‟ disease are haematophagous organisms in all of its evolvement phases. Their feeding success is greatly related to their salivary glands content. The presence of a pool of specific proteins allows this insect to access its food by counteracting host haemostatic mechanisms, such as platelet aggregation, clotting and vasoconstriction, as well as host inflammatory reactions. Since these components are relevant in controlling the Trypanosoma cruzi transmission process, the salivas of epidemiologically significant triatomine bugs in Brazil, Panstrongylus megistus at Cerrado and Atlantic Rainforest Biomas, and Rhodnius brethesi and Rhodnius robustus at Amazon region, were harvested and submitted to proteomic research. Initially, the experimental conditions for wide-pH-ranged separation by two-dimensional electrophoresis (2DE) separation at wide pH range were optimized. The average number of spots of each salivary profile varied from 129 to 320. Comparative analysis of all two-dimensional maps revealed divergence among genera. The identification of the obtained protein spots from such maps was made by peptide mass fingerprinting, peptide fragmentation and de novo sequencing using MALDI-TOF/TOF mass spectrometers. The data revealed largely anti-haemostatic profiles for Rhodnius salivas, which presented mainly lipocalins, potential anti-platelet aggregation proteins. Proteomic analysis of Panstrongylus megistus saliva is still in progress and the first results imply the presence of potentially anti-platelet aggregation proteins too. Salivary proteomes of these triatominae vectors appear to be rich in platelet aggregation inhibitors which promote the blood feeding of these insects. Future analysis of these and other salivary spots will permit better understanding of vector-host interaction and lead to the possibility of new findings on pharmacologically active molecules useful for haemopathy treatments.