Caracterização de isolados de Erwinia psidii do Distrito Federal e detecção sorológica em goiabeiras

Abstract

A seca dos ponteiros da goiabeira (Psidium guajava L.) causada por Erwinia psidii (Rodrigues Neto et al., 1987) tem sua ocorrência mundial limitada ao Brasil, tendo sido detectada pela primeira vez no estado de São Paulo em 1982. Atualmente, essa bacteriose encontra-se também no Distrito Federal (DF), em Minas Gerais, Espírito Santo e Paraná. No DF, é considerada uma das doenças mais importantes da goiabeira pois, além de provocar grandes perdas na produção, é também uma doença de difícil controle. Considerando-se a escassez de estudos sobre essa bacteriose e o pouco conhecimento que se tem sobre a diversidade genética das populações de E. psidii nos pomares locais, além da suposição de que essa doença tenha sido introduzida através de mudas contaminadas assintomáticas provenientes de São Paulo, os objetivos desse trabalho foram (1) caracterizar por meio de testes bioquímicos, nutricionais e de patogenicidade, isolados bacterianos coletados em diferentes pomares na região de Brazlândia –DF; (2) caracterizar a diversidade genética entre os isolados de Brazlândia-DF obtidos de diferentes pomares e em diferentes épocas, e compará-los aos isolados de outros estados através de rep-PCR (REP, ERIC e BOX-PCR); (3) testar a especificidade de um antissoro policlonal para E. psidii, e desenvolver uma metodologia que permita sua detecção em mudas assintomáticas através do método de imunodifusão radial dupla. Todos os isoldados do DF, com exceção de UnB11 e UnB13, apresentaram-se como bactérias Gram-negativas, anaeróbicas facultativas, que produzem ácido a partir de manitol, mas não a partir de rafinose, não reduzem nitrato a nitrito, produzem enzima catalase e não apresentaram v reação de hipersensibilidade em folhas de fumo. Todos os resultados foram condizentes com o perfil descrito por Rodrigues Neto, et al. (1987) para a espécie. O teste de patogenicidade permitiu distinguir os isolados em três grupos de agressividade de acordo com o tempo de aparecimento dos sintomas. As comparações entre os perfis de amplificação obtidos por rep-PCR, a partir do DNA purificado de 43 isolados de E. psidii, revelaram alta similaridade entre os isolados do DF coletados em diferentes pomares e em diferentes épocas, e também alta similaridade entre os isolados do DF, e aqueles provenientes de outros estados, incluindo o isolado tipo IBSBF 435. A partir do enriquecimento bacteriano em extrato de folhas de goiabeira esmagadas, e a utilização da técnica de imunodifusão radial dupla com antissoro específico para E. psidii, foi possível detectar o patógeno após 36 horas de incubação das folhas contaminadas artificialmente. Testes realizados em casa de vegetação com mudas sadias inoculadas por aspersão com suspensão bacteriana de E. psidii, permitiram verificar o aparecimento de sintomas em plantas intactas, ou seja sem ferimentos prévios, indicando que a bactéria pode também penetrar por aberturas naturais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT

The bacterial blight of guava (Psidium guajava L.) caused by Erwinia psidii is a serious disease affecting orchards in Brazil and it has not been reported in any other country. In Brazil, it was first detected in São Paulo state in 1982. Currently it is present in the Federal District (DF) and three other states (Minas Gerais, Espírito Santo and Paraná). In those production areas it has been considered a major disease, causing significant losses. Control measures are difficult to apply since the pathogen can be easily disseminated. Very little is known about the genetic diversity of E. psidii in Brazil and the objective of this study was to characterize 43 isolates, most of them collected in different orchards in the Federal District. All isolates showed biochemical and nutritional features according to those described for E. psidii. Pathogenicity tests were performed using detached branches and the symptoms were visible from one to nine days after inoculation, depending on the isolate aggressiveness. Genetic diversity among the isolates was evaluated by rep-PCR (REP, ERIC and BOXPCR) which showed high similarity among the Federal District isolates, collected in different orchards and periods. High similarity was also observed between this group of isolates and those from the other three states, including the type strain IBSBF 435. A polyclonal antiserum against the type strain was produced in rabbits and showed high specificity. It was used to optimize a serology-based methodology, using double immunodifusion for early detection of E. psidii in plantlets. Enrichment of the bacterial population directly on guava leaves extracts allowed the detection of the pathogen 36 hours after incubation, even from an initial artificial contamination of 103 ufc/ml.