Caracterização de Mananases Produzidas por Clonostachys byssicola Quando Crescido em Casca de Grão da Soja

Abstract

No Brasil a aplicação da sacarificação enzimática em resíduos agrícolas, como a casca do grão da soja, é uma metodologia cada vez mais empregada, a fim de obter açúcares fermentescíveis que podem ser destinados a diversos processos biotecnológicos. A identificação de grandes porcentagens de componentes hemicelulósicos compondo a parede celular da casca do grão de soja em detrimento dos complexos de lignina; proporcionou a secreção de diferentes enzimas holocelulolíticas pelo fungo filamentoso Clonostachys byssicola. Neste contexto, as mananases produzidas por C. byssicola foram caracterizadas a fim de identificar as propriedades bioquímicas destas enzimas. Durante a caracterização enzimática, as mananases obtiveram maiores atividades em pH ácido (5,0) e temperatura moderada (50 oC). Além do mais, os estudos dos efeitos de diversos íons e compostos fenólicos ressaltaram que as mananases de C. byssicola não dependem de nenhum componente adicional para que haja a ativação enzimática. No entanto, todos os compostos fenólicos utilizados foram capazes de inibir a atividade das mananases. A identificação de diferentes formas de mananases presentes no extrato bruto concentrado mostrou-se significativa para a produção de mano-oligossacarídeos em diferentes fontes de carbonos, constatando que essas enzimas são ferramentas promissoras para a produção de prebióticos (também denominados oligossacarídeos). A análise por HPLC evidenciou que os principais oligossacarídeos detectados durante a degradação dos resíduos lignocelulósicos, como a casca do grão de soja e o bagaço de cana, foram as manotrioses. Em contrapartida, dentre os produtos gerados pela hidrólise de galactomananas (goma de alfarroba e goma de guar) oligossacarídeos de tamanhos diversos tal como manobiose, manotriose, manotetraose, manopentose e manohexaose foram identificados. Diversas tentativas de identificação das mananases de C. byssicola por espectrometria de massas utilizando o genoma de C. rosea, evidenciou que ambas as espécies apresentam diferenças expressivas nas sequências de cDNAs. Desta maneira o sequenciamento do RNA total de C. byssicola foi capaz de identificar diferentes contings, caracterizados in silico, correspondentes a sequências de mananases, constatando o potencial desse fungo em produzir diferentes tipos de mananases.