Crestamento bacteriano do feijoeiro no Brasil : distribuição, diversidade e detecção de seus agentes causais Xanthomonas spp.

Abstract

O crestamento bacteriano comum (CBC) é a doença de origem bacteriana mais importante do feijoeiro comum. É causado por quatro linhagens genéticas pertencentes a duas espécies do gênero Xanthomonas, Xanthomonas citri pv. fuscans, Xcf (linhagem fuscans, NF2 e NF3) e X. phaseoli pv. phaseoli,Xpp (NF1). Os objetivos deste estudo foram: i) validar a PCR multiplex com todos os iniciadores específicos já disponíveis para a detecção simultânea das duas espécies; ii) a partir de uma coleção representativa caracterizar a coleção de isolados quanto às linhagens genéticas e à diversidade dos genes efetores tipo III; iii) avaliar a virulência de isolados, representativos dos diferentes perfis de efetores, em genótipos de feijoeiro; vi) avaliar a transmissão dos patógenos planta-semente ao longo de duas gerações; v) desenvolver um método LAMP para identificação rápida e sensível de Xpp e Xcf em sementes e folhas de feijoeiro. A metodologia empregada incluiu testes de patogenicidade na cultivar BRS Ártico, técnicas moleculares (PCR multiplex, amplificação de genes efetores tipo III, validação de ensaio LAMP, e sequenciamento dos genes gyrB e rpoD), ensaios de virulência em casa de vegetação e ensaios de transmissão para a semente em campo. A identidade de 117 isolados da coleção foi confirmada como fuscans (55 isolados) e não fuscans (62 isolados) pela patogenicidade na cultivar BRS Ártico, e PCR multiplex com iniciadores específicos. Isolados de Xanthomonas coletados em Goiáis em 2014, não foram enquadrados em nenhuma das duas espécies, no entanto, sua patogenicidade foi confirmada via inoculação por aspersão sem ferimentos na cultivar BRS Ártico sob condições de alta temperatura e umidade. A análise filogenética permitiu discriminar os isolados nas quatro linhagens genéticas das espécies Xpp e Xcf, e identificar a ocorrência da espécie X. cannabis pv. phaseoli (Xcp) no Brasil. Uma sub- amostra de 42 isolados de Xpp e Xcf foi avaliada quanto á presença de 15 genes efetores tipo III, e verificou-se a ocorrência de 6 haplótipos (perfis distintos). X. cannabis pv. phaseoli apresentou apenas cinco efetores tipo III. Entre os isolados da linhagem fuscans apenas um haplótipo foi identificado, enquanto para as demais linhagens os perfis de efetores foram variáveis. Um isolado representante de cada haplótipo foi inoculado em 15 cultivares de feijoeiro revelando variabilidade na virulência entre as linhagens genéticas, sendo a linhagem fuscans (Xcf) a mais virulenta, seguida da linhagem NF1 (Xpp) e depois NF2 (Xcf). Houve interação significativa entre os isolados e genótipos, indicando a possível ocorrência de raças do patógeno. A transmissão do patógeno pela semente foi avaliada em 24 genótipos de feijoeiro em campo durante duas gerações. Observou-se que a redução da severidade da doença não implica na redução da população bacteriana na semente, e que a transmissão planta- semente não é influenciada pelo genótipo da hospedeira. Por fim, foi desenvolvido um método LAMP para a detecção de Xcf e Xpp nas sementes e parte aérea, que se mostrou especifico e sensível, além de reduzir significativamente o tempo da diagnose, em função da detecção visual dos produtos da amplificação.