Identificação e caracterização de peptídeos ativos sobre bactérias patogênicas isolados da pele do anuro Boana raniceps (Cope, 1862)

Abstract

O número de microrganismos patogênicos multirresistentes vem crescendo nos últimos anos devido ao uso inadequado dos antibióticos comerciais atualmente disponíveis, sendo assim necessária a busca de novas drogas que possam atuar como agentes antimicrobianos. Os peptídeos antimicrobianos (PAMs) têm se mostrado como uma alternativa promissora para o desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas. As glândulas serosas da pele dos anuros são uma rica fonte de peptídeos antimicrobianos e antiparasitários. O presente projeto teve como objetivo isolar, purificar e caracterizar química e biologicamente peptídeos antimicrobianos presentes na secreção cutânea do anuro Boana raniceps. A secreção cutânea de B. raniceps foi fracionada por RP-HPLC empregando coluna C18 onde foram identificados e purificados sete peptídeos antimicrobianos. Os peptídeos isolados foram submetidos a sequenciamento químico por degradação de Edman e análises de similaridade revelaram que o peptídeo Br18 corresponde a um fragmento da Figainina 2 e os demais correspondem às Ranaseptinas 3, 6, 7 e 8 previamente identificadas a partir de uma biblioteca de cDNAs gerada para essa espécie. Finalmente, o peptídeo Br17 corresponde a uma nova Raniseptina com alta similaridade com as Raniseptinas 10 e 6, sendo que o peptídeo Br17 apresenta uma deleção dos dois resíduos de aminoácidos da porção N-terminal em relação às Raniseptinas citadas. Após uma avaliação preliminar, as Raniseptinas 3 e 6 foram sintetizadas quimicamente e suas propriedades antimicrobianas e hemolíticas foram avaliadas. As duas Raniseptinas sintetizadas mostraram-se bastante ativas exibindo mesmos valores de MIC sobre as bactérias Gram-negativas: E. coli (MIC = 2 μM) e K. pneumoniae (MIC = 1 μM). No caso das bactérias Gram-positivas testadas, os peptídeos mostraram-se menos ativos, sendo que a Rsp-3 exibiu valores de MIC iguais a 4 e 8 μM para S. aureus e S. epidermidis, respectivamente, enquanto a Rsp-6 mostrou-se menos efetiva sobre a bactéria S. aureus exibindo um valor de MIC igual a 32 μM. Ambos os peptídeos não foram capazes de inibir completamente o crescimento da levedura C. albicans, mesmo na maior concentração empregada (128 μM). As Raniseptinas 3 e 6 revelaram-se pouco hemolíticas, promovendo menos de 5% de hemólise nas concentrações onde a atividade antibacteriana foi relevante (entre 2 e 8 μM). O presente estudo reforça o potencial terapêutico dos peptídeos antimicrobianos presentes nas secreções cutâneas dos anuros que, quando explorados adequadamente, podem ser úteis no desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos.