Imitadores sintéticos de miR-7 E miR-34a associados ao paclitaxel na terapia experimental in vitro de câncer de mama

Abstract

O câncer de mama é o segundo mais frequente no mundo, com mais de 2 milhões de novos casos diagnosticados em 2018. Paclitaxel é um antineoplásico amplamente utilizado, entretanto, seus efeitos adversos comprometem a continuidade do tratamento, gerando impacto na progressão da doença. Estudos baseados em RNA de interferência revelaram microRNAs como potencializadores terapêuticos, apontando o controle pós-transcricional da expressão gênica como alternativa promissora para o tratamento do câncer. Neste sentido, miR-34a e miR-7 se destacam como supressores tumorais no câncer de mama, visto que regulam genes envolvidos em vias de sinalização, proliferação celular e metástase. Assim, o aumento do conteúdo destes microRNAs em células cancerosas, por meio de imitadores sintéticos, representa uma nova abordagem terapêutica da doença. No presente estudo objetivou-se avaliar a capacidade dos imitadores sintéticos de miR-34a e miR-7 em sensibilizar as células de tumor mamário, das linhagens MCF-7 (ER+) e MDA-MB-231 (triplo-negativa), para os efeitos do paclitaxel. O nível de expressão gênica de miR-7 e miR-34a foi determinado por RT-qPCR e calculado pelo método 2-ΔΔCT. A viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico de MTT e a análise morfológica por meio de microscopia óptica. A linhagem MDA-MB-231 apresentou menor expressão basal de microRNAs em relação à MCF-7, tanto de miR-34a quanto de miR-7. O tratamento com 100 nM de paclitaxel promoveu o aumento da expressão dos microRNAs em estudo, em ambas as linhagens, exceto na expressão de miR-7 na linhagem MCF-7, na qual teve efeito oposto. A transfecção de células tumorais com imitadores sintéticos de miR-34a (30 nM) e de miR-7 (10 nM) reduziu a viabilidade celular em relação ao controle negativo, em ambas as linhagens testadas. A associação entre miR-34a mimic (30 nM) e paclitaxel (100 nM) foi mais efetiva na redução da viabilidade celular na linhagem MDA-MB-231, comparativamente ao uso isolado do paclitaxel (74,7% versus 83,5%). Na linhagem MCF-7 houve a mesma tendência, porém sem significância estatística (77,6% versus 81,0%). Já a associação entre miR-7 mimic (10 nM) e paclitaxel (100 nM) foi mais efetiva na redução da viabilidade em comparação à terapia isolada, tanto em células MCF-7 (44,6% versus 77,2%) quanto em células MDA-MB-231 (73,3% versus 85,6%). Quando avaliados na mesma concentração (30 nM), mir-7 apresentou resultados mais expressivos que miR-34a na redução da viabilidade celular, em ambas as linhagens MCF-7 (37,9% versus 74,0%) e MDA-MB-231 (74,7% versus 88,8%). O aumento do conteúdo de miR-7 mediante oligonucleotídeos sintéticos na concentração de 10 nM promoveu alterações morfológicas, como perda de prolongamentos citoplasmáticos, rompimento da membrana e maior granulosidade, nas duas linhagens estudadas, porém mais evidentes na linhagem MCF-7. Com o presente estudo foi possível concluir que o uso de imitadores sintéticos de miR-34a e miR-7 representa uma abordagem promissora na terapêutica do câncer de mama e a associação destes microRNAs com paclitaxel apresenta, no geral, efeitos superiores em relação à terapia isolada sobre as alterações morfológicas e de viabilidade celular. Entre os microRNAs testados, miR-7 apresenta maior potencial terapêutico e surge como alvo promissor para a terapia gênica do câncer de mama.