Delineamento proteômico do fluido lacrimal de equinos

Abstract

Proteoma é o perfil proteico de um conjunto de proteínas expressas em um dado momento, e proteômica é a análise do proteoma de um órgão, um tecido, um certo tipo celular, ou um fluido biológico, como a lágrima. O fluido lacrimal pré corneal é considerado uma amostra ideal para diagnóstico rápido pela sua relativa pureza e coleta não invasiva, sem necessidade de contenção química dos animais. Com o aprimoramento da espectrometria de massa foi possível demonstrar com mais clareza que mudança no perfil proteico lacrimal reflete alterações oculares e sistêmicas, mas em animais domésticos poucos estudos foram realizados nesse sentido. Afim de realizar a análise qualitativa e comparativa do proteoma da lagrima de equinos, selecionou-se cavalos saudáveis e sem alterações oftálmicas, provenientes do 1º Regimento de Cavalaria de Guarda do Exército Brasileiro com sede em Brasília – DF, da raça brasileiro de hipismo, de ambos os sexos e dentro de duas faixas etárias. Para tal, 80 μL do filme lacrimal foi coletado a partir do menisco lateral inferior de um ou ambos os olhos, com auxílio de um tubo microcapilar de vidro graduado. Para descrição do proteoma lacrimal, os cavalos foram divididos em cinco grupos de oito indivíduos; e para a análise comparativa das proteínas lacrimais, os animais foram distribuídos em 16 grupos de dois indivíduos. Nos dois experimentos, os indivíduos foram agrupados com características homogêneas quanto ao gênero e faixa etária. As amostras lacrimais receberam processamento semelhante até serem injetadas no sistema cromatográfico do espectrômetro de massa, Orbitrap. As proteínas foram identificadas e agrupadas a partir dos seus termos GO (ontologia gênica), em componente celular, processo biológico e função molecular as quais fazem parte, com mapeamento de 1.990 proteínas no fluido lacrimal de cavalos. No experimento comparativo foi possível diferenciar os animais em relação ao sexo e idade, ou ambos, de acordo com a regulação das proteínas lacrimais, com 54 proteínas sendo reguladas pelo sexo, oito proteínas reguladas pela idade e onze reguladas pela interação de ambos os fatores, sexo e idade. O padrão proteico da lágrima de equinos foi descrito pela primeira vez e poderá ser utilizado como fonte de referência para estudos da lágrima resultante de alterações oculares e sistêmicas desta espécie animal.