Imunogenicidade da Trr1 e seu uso potencial como alvo-molecular para imunoterapia em fungos patogênicos humanos

Abstract

O aumento no número de pacientes imunocomprometidos no final do século XX acompanhou um crescimento na incidência de doenças oportunistas, com o surgimento de mais casos de indivíduos infectados por fungos patogênicos. Entre os patógenos relacionados a morbi-mortalidade dessas infecções, destaca-se o fungo Candida albicans. Este está presente no organismo humano de forma saprofítica, porém em situações de desequilíbrio microbiológico e imunológico, sofre dimorfismo e provoca invasão tecidual. Outro fungo é Cryptococcus neoformans também frequentemente encontrado no organismo e patogênico em pacientes imunocomprometidos ocasionando criptococcose que na forma mais grave pode atingir o sistema nervoso e provocar meningoencefalite. Uma terceira micose que é importante destacar é a paracoccidioidomicose, que possui relevância clínica na América Latina e é causada por espécies do gênero Paracoccidioides sp. Está mais associada a um aspecto econômico-social, atingindo trabalhadores rurais provocando efeitos limitantes na qualidade de vida do paciente. Existem tratamentos com antifúngicos para essas três infecções, porém os fármacos disponíveis para o tratamento dessas doenças restringem-se a apenas alguns alvos celulares como parede, membrana e ácidos nucléicos; além de provocarem graves efeitos adversos e já terem sido associados a casos de resistência. Diante desse contexto, existe uma necessidade de descoberta de novos fármacos, e vários estudos recentes têm buscado abordagens terapêuticas que possam originar novas estratégias farmacológicas. Imunoterapias são técnicas mais atuais e promissoras para o tratamento de doenças infecciosas, porém ainda não estão disponíveis contra fungos patogênicos humanos. Esse projeto utilizou dados de um estudo de genômica comparativa realizado em nosso grupo de pesquisa que identificou a o gene trr1 e seus produtos como um potencial alvo para novos antifúngicos. Baseado no interesse em desenvolver novas abordagens terapêuticas contra fungos patogênicos associado a crescente utilização de imunoterapia no tratamento de diversas doenças, a proteína Trr1, responsável por manter o equilíbrio redox da célula, foi analisada como alvo de estudo de anticorpos. Foram produzidas proteínas recombinantes de três espécies de fungos patogênicos, C. albicans, C. neoformans e P. lutzii, que foram utilizadas para a imunização de camundongos a fim de gerar anticorpos policlonais. Os animais foram imunizados de duas maneiras diferentes, 1) repetidas vezes apenas com a proteína de uma única espécie fúngica ou 2) com as proteínas das três espécies alternadamente. Durante o processo de imunização, os títulos de anticorpos foram analisados contra os três tipos de proteínas, a fim de determinar a capacidade de reatividade cruzada dos anticorpos gerados. Os anticorpos policlonais foram utilizados para imunolocalização da proteína em cada uma das espécies. Por fim, linfócitos dos animais imunizados foram fusionados com células de mieloma para a geração de hibridomas e produção de anticorpos monoclonais. Alguns anticorpos foram capazes de se ligar a pelo menos uma proteína e serão alvo de estudos de caracterização em relação a toxicidade e capacidade de proteção a fim de analisar a potencialidade de tornarem-se uma nova abordagem terapêutica.