Caracterização de Archaea cultivadas a partir de amostras de um aquário de água doce

Abstract

Em 1990, Woese e colaboradores classificaram os seres vivos em três domínios distintos: Bacteria, Archaea e Eukarya. Inicialmente, as archaeas foram relacionadas apenas a ambientes extremos como fontes termais, ambientes salinos, ácidos e anaeróbios. Posteriormente, com avanço das técnicas moleculares, foram detectadas archaeas em diversos ambientes não extremos como solos, sedimentos e ambientes aquáticos, revelando a ubiquidade desse domínio. No entanto, o cultivo laboratorial de archaeas não extremas ainda é pouco expressivo e muitos aspectos de sua biologia permanecem desconhecidos. Trabalhos prévios de nosso grupo resultaram na obtenção de culturas mistas de archaeas e bactérias, a partir de amostras de um aquário residencial de água doce. Diferentes tipos coloniais foram obtidos e, no presente trabalho, a cultura denominada Kappa C foi caracterizada. A manutenção dessa cultura foi realizada em meios confeccionados empregando-se a água do aquário acrescida de antibióticos e antifúngicos, com o objetivo de tornar o meio seletivo para archaeas. Paralelamente, foi adicionado cloreto de amônio em alguns meios de cultura, visando o enriquecimento de archaeas oxidantes amônia (AOA). Os microrganismos presentes no tipo colonial Kappa C foram caracterizados quanto à morfologia celular por diferentes técnicas de microscopia, revelando pequenas células cocóides e bacilos. As células presentes no cultivo foram submetidas à extração de DNA total para a realização de ensaios de PCR com os iniciadores específicos para o gene codificador de rRNA 16S de Archaea, Bacteria, assim como para o gene amoA de Archaea. Os resultados revelaram a presença de diversas sequências classificadas como archaeas metanogênicas, do filo Euryarchaeota. Foram também obtidas sequências classificadas como pertencentes aos grupos I.1b de Thaumarchaeota, capazes de oxidar amônia, e grupo I.1c, que ainda não possui representantes cultivados. Também foram identificadas sequências classificadas nos filos Bathyarchaeota e Parvarchaeota, que também não apresentam representantes cultivados até o momento. Apesar do uso de antibióticos de amplo espectro, as análises revelaram a presença de sequências de bactérias do gênero Pandoraea. Dessa forma foi revelado que o tipo colonial Kappa C consiste em uma co-cultura de diferentes archaeas e, pelo menos um gênero de bactéria.