Avaliação da ativação de células dendríticas murinas por isolados de Paracoccidioides brasiliensis diferindo em virulência

Abstract

O Paracoccidiodis brasiliensis (Pb) é o agente etiológico da principal micose sistêmica da América Latina, a Paracoccidiodemicose (PCM). Desde a sua descrição, o Pb vinha sendo descrito como a única espécie, mesmo existindo uma grande diversidade em relação a sua virulência. A infecção se inicia pela inalação de propágulos presentes no ar derivados da forma miceliana do fungo. Após a inalação, os propágulos se alojam principalmente nos pulmões. A reposta imunológica observada pode estar relacionado à resposta Th1 ou Th2 e ultimamente tem se mostrado de grande importância para o hospedeiro a resposta Th17. Nosso trabalho objetiva apontar a resposta imunológica promovida contra dois isolados de virulência variável, o Pb265 (pouco virulento) e o Pb18 (muito virulento) em células dendríticas (DCs) e in vivo. DCs infectadas com Pb265 ou Pb18 tiveram seu mRNA extraído para análise em PCR Array para genes da resposta anti-fúngica e da imunidade inata. DCs de camundongos C57bl/6, com ou sem inibidores de receptores PRRs e de vias de sinalização e DCs de camundongos TLR2-/-, TLR4-/-, Dectina-1-/- foram submetidas à infecção com os mesmos isolados, após 6 horas tiveram o sobrenadante coletado para dosagem das citocinas TNF-α, Il-12, Il-6, CCL-2, Il-10, Il-23. Um co-cultivo de DCs, esplenócitos totais e os dois isolados foi feito e depois de 5 dias o sobrenadante foi coletado para dosagem de Il-13, IFN-γ, Il-17. Por último, camundongos WT e Dectina-1-/- foram infectados intra traquealmente e sacrificados depois de 45 dias seus pulmões coletados e analisada a expressão de células CD3+CD4+, CD3+CD8+, F4/80+ além de dosagem das citocinas TNF-α, IFN-γ, Il-10. A modulação positiva para o gene da Dectina-1 nas DCs infectadas com Pb265, associado a outros genes de moléculas adaptadoras dessa via (Card9, Malt1 e SyK) sugerem uma ativação clássica de reconhecimento e resposta a esse isolado do P. brasiliensis, corroborando com esse fato está a produção mais acentuada de Il-12 e IFN-γ e uma maior produção de Il-10 e Il-17 pelo Pb18 sem a expressão do gene para Dectina- 1 mas modulando positivamente o gene do CLR mincle e apontam para uma resposta Th17, diferente do isolado menos virulento. A análise in vivo apresentou diferença na produção de citocinas indicando que o processo inflamatório desenvolveu-se distintamente entre os camundongos infectados com os dois isolados com maior produção de Il-10 e Il-17 no camundongo infectado com o Pb18 e que a produção de citocinas e a migração celular é fortemente influenciada pelo reconhecimento pela Dectina-1. Esses dados nos fazem crer que o padrão de resposta imunológica Th1 para o Pb265 e Th17 para o Pb18 com maior produção de Il10 nesse segundo sejam os principais parâmetros para diferença imunológica entre esses isolados, abrindo assim novas perspectivas para o entendimento da imunopatologia da PCM.