Caracterização de células-tronco de polpa dental humana obtida de dentes decíduos e permanentes

Abstract

Células-tronco adultas representam uma nova abordagem em terapia regenerativa. Recentes pesquisas revelaram que o tecido pulpar de dentes humanos permanentes e decíduos contém células-tronco com grande potencial proliferativo, apresentam capacidade de auto-renovação e de diferenciação em diversas linhagens celulares in vitro. O objetivo deste projeto foi comparar o perfil morfológico e proliferativo dos tipos celulares cultivados e caracterizar as células-tronco pulpares humanas de dentes permanentes (CPdp) e decíduos (CPdd) em relação a dois métodos de isolamento. Terceiros molares impactados e dentes decíduos recém-esfoliados foram coletados, limpos e seccionados no limite da junção cemento-esmalte. Os tecidos pulpares foram cuidadosamente removidos e cultivados, utilizando os métodos de isolamento por digestão enzimática com solução de 3mg/mL de colagenase tipo I e 4mg/mL de dispase e pela cultura direta do fragmento do tecido pulpar. Realizamos análises morfológicas e do potencial proliferativo. Para a caracterização do perfil imunofenótipo foram utilizados anticorpos monoclonais anti: CD117, CD34, CD45 RA e a avaliação em citometria de fluxo. Nossos resultados indicaram grande potencial proliferativo in vitro de CPdp e CPdd, principalmente para CPdd. Os tipos celulares apresentaram imunofenótipo compatível para células-tronco, sendo expressivamente positivos para CD117, independente do método de isolamento. Houve diferença na expressão do CD34 entre os grupos celulares. A análise fenotípica final demonstrou as CPdp como CD117+, CD34- e CD45-, e as CPdd como CD117+, CD34+ e CD45-. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Adult Stem cells represents a new approach in regenerative therapies. Recents researches have shown that postnatal and deciduous dental pulp contains stem cells with high proliferation capacity, ability to self-renew and to differentiate into multiple cell lineages. The aim of this study was to compare the morphological and proliferative profiles of the cells types in dental pulp of permanents and deciduous teeth, and to characterize the progeny by two isolation methods in vitro. Normal human impacted third molars and exfoliated deciduous teeth were collected, cleaned and cut around the cementum-enamel junction. The pulp tissue was gently separated from de crown and root. Pulp cell cultures were established via two approaches by enzyme digestion in a solution of 3mg/mL collagenase type I and 4mg/mL dispase and by culture of the explants into a tissue culture dishes. We performed morphological, proliferative analyses and immunophenotype studies to characterize the progeny using a cytometer for monoclonal antibodies: CD117, CD34, CD45 RA. Our findings indicated high proliferative rates for permanents and deciduous teeth, mainly for deciduous teeth. The cells population showed phenotypes compatibles for stem cells, with remarkable positive expression of the marker CD117, irrespective of the isolation method. We identified significant difference for the expression of CD34 among the cells groups. The immunophenotype profiles were CD117+, CD34- and CD45- for cells from permanents teeth, and CD117+, CD34+ and CD45- for cells from deciduous teeth.