Sequenciamento global de microRNAS em soro de medula óssea ao diagnóstico e ao seguimento do tratamento de leucemia linfoide aguda (LLA)

Abstract

MicroRNAs circulantes são encontrados em todos os fluidos corporais e podem ser associados com a modulação do microambiente tumoral e progressão de doenças. Na presença de células cancerosas, componentes presentes no microambiente normal, tornam-se desregulados, promovendo a sobrevivência celular, a progressão da doença e resistência às drogas. Vários microRNAs atuam como participantes no processo de desenvolvimento de leucemia, quer aumentando ou diminuindo os níveis de expressão. Aqui, mostramos dados onde microRNAs circulantes foram identificados no soro de medula óssea de pacientes com leucemia linfoide aguda (LLA). Foram investigados, por smallRNA seq a presença de microRNAs no microambiente do tumor em amostras de soro de quatro pacientes, colhidos ao diagnóstico (fase um) e durante o seguimento do tratamento quimioterápico (fase dois e três). No total, foram identificados 946 microRNAs conhecidos, apenas os microRNAs com o mínimo de cinco leituras por milhões em uma das fases foram consideradas, totalizando 391 microRNAs. Após a análise estatística, somente microRNAs com diferença de expressão entre as fases de tratamento com um valor de p em 0,05 foram considerados. Entre eles, 258 apresentaram número de leituras com diferença significativa entre a fase um e a fase dois, 199 entre a fase um e três e 237 comparando fase dois e três. Os seis microRNAs com diferença mais significativa entre as fases foram relacionados em outras doenças com a atuação como proto-oncogenes, progressão, invasão, angiogênese, metástase tumoral, inibição de apoptose e promotor de crescimento celular. O miR-486-5p foi o maior em quantidade de leituras (reads) e aquele com a maior diferença significativa entre as fases, diminuindo durante o tratamento, com exceção do paciente com recidiva da doença. Sugerindo que este microRNA 486-5p, possa ser utilizado como biomarcador associado ao resultado do tratamento. O microRNA 423, descrito como participante no crescimento celular, possibilitou a estratificação entre os grupos de risco, indicando sua possível utilização como marcador na classificação de risco dos pacientes. Esse estudo é o primeiro a relacionar os microRNAs circulantes em microambiente tumoral durante as etapas de tratamento quimioterápico e a sugerir o uso como biomarcadores. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Circulating microRNAs have been found in all body fluids and could be associated with modulation of tumor microenvironment and progression of diseases. In the presence of cancer cells, components present in normal microenvironment, become deregulated, promoting cell survival, disease progression and drug resistance. Several microRNAs act as participants in the process of development leukemia either increasing or decreasing the expression levels. Here, we show data where circulating microRNAs were found in bone marrow serum from acute lymphoblastic leukemia (ALL) patients. We investigated, by smallRNA seq the presence of microRNAs in tumor microenvironment from four patients, collected diagnosis (phase one) and during sequence chemotherapy treatment (phase two and three). In totally, 946 known microRNAs were identified, only microRNAs with minimum of five reads per million in one of phases were considered, totaling 391 microRNAs. After statistical analysis, only microRNAs with expression difference between treatment phases with a p value under 0,05 were considered. Among them, 258 presented significant difference expression between phase one and two, 199 between phase one and three and 237 comparing phase two to three. The six more different expressed microRNAs have been linked with other diseases acting as proto-oncogenes, progression, invasion, angiogenesis, tumor metastasis, inhibition apoptosis and cell growth promoter. The miR-486-5p was the largest in number reads and the one with the most significant difference between the phases, decreasing during treatment, except for patients with relapsed disease. Suggesting that this microRNA 486-5p could be used as biomarker associated to treatment outcome. The microRNA 423, described as participating in cell growth, was able stratify risk among groups, indicating its possible use as a biomarker in the risk classification. This study is the first to relate the circulating microRNAs in the tumor microenvironment during the stages of chemotherapy and suggested their use as biomarkers.