Estudo da população e criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais de cadelas

Abstract

O objetivo desse trabalho foi definir as características populacionais, morfológicas e ultraestruturais de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) e comparar o efeito das técnicas de criopreservação de congelamento lento (CL) e vitrificação (V) de tecido ovariano de cadela sobre a morfologia dos FOPA. A média da estimativa da população de FOPA de cadelas foi de 48541±18366, onde 94,25% eram primordiais (45145±16076), 4,92% primários (2358±1253) e 0,83% secundários (397±351). A média de diâmetro do folículo, ovócito e núcleo do ovócito e número de células da granulosa de folículos primordiais foram 27,5±4,2μm, 21,7±2,7μm e 11,3±1,6μm e 6,0±1,8 respectivamente. Para folículos primários foram, respectivamente, 42,6±12,5μm, 27,8±7,5μm, 13,7±2,6μm e 15,0±7,0. Para folículos secundários, foi 101,6±62,9μm para diâmetro do folículo, 48,0±12,6μm para diâmetro do ovócito, 18,7±4,2μm para diâmetro do núcleo do ovócito e 61,5±63,5 células da granulosa. A porcentagem total de FOPA morfologicamente normais foi de 93,66±6,81% para o grupo controle, 86,16±11,05% para o CL e 68,14±12,75% para a V. Para folículos primordiais a porcentagem de FOPA normais foi 96,69±4,72% no controle, 89,51±10,39% no CL e 75,32±9,23% na V. Para folículos primários e secundários os valores foram, respectivamente, 94,80±6,91% e 87,62±17,12% para o controle, 86,8±12,15% e 76,35±26,34% para CL e 61,53±14,78 e 52,25±22,13% para a V. Não houve diferença significativa na porcentagem de FOPA morfologicamente normais entre o CL e o grupo controle. Já na V essa porcentagem foi significativamente inferior aos outros 2 grupos (P<0,05). A ultraestrutura de folículos pré-antrais de cadela mostrou ser semelhante à descrita para outras espécies. Após criopreservação por CL os folículos apresentaram danos ultraestruturais, enquanto após vitrificação os folículos primordiais e primários estavam bem preservados. No entanto, os folículos secundários foram muito danificados em ambos os tratamentos. Em conclusão, este trabalho descreveu as características morfométricas, ultraestruturais e populacionais dos FOPA de cadela. A vitrificação foi mais eficiente em preservar a ultraestrutura dos folículos primordiais e primários que o congelamento lento. Os dois métodos de criopreservação testados apresentam resultados promissores, mas ainda precisam de aperfeiçoamento, especialmente em relação à preservação de folículos secundários. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT

The aim of this study was to define the population, morphological and ultrastructural characteristics of bitch preantral follicles (PAF) and to compare the effects of two cryopreservation techniques - slow freezing (SF) and vitrification (V) - of bitches ovarian tissue on the morphology of PAF. The average population of PAF was 48,541 ± 18,366, where 94.25% were primordial (45145 ± 16076), 4.92% primary (2358 ± 1253) and 0.83% secondary (397 ± 351). The average diameter of the follicle, oocyte and the oocyte nucleus and the number of granulosa cells for primordial follicles were 27.5 ± 4.2μm, 21.7 ± 2.7μm, 11.3 ± 1.6μm and 6.0 ± 1.8, respectively. For primary follicles the values were, respectively, 42.6 ± 12.5μm, 27.8 ± 7.5μm, 13.7 ± 2.6μm and 15.0 ± 7.0. For secondary follicles follicle diameter was 101.6 ± 62.9μm, oocyte diameter was 48.0 ± 12.6μm, nucleus diameter was 18.7 ± 4.2μm, and the number of granulosa cells was 61.5 ± 63.5. The overall percentage of morphologically normal PAF was 93.66 ± 6.81% for the control group, 86.16 ± 11.05% for SF and 68.14 ± 12.75% for V. The percentage of normal primordial follicles was 96.69 ± 4.72% in control, 89.51 ± 10.39% in SF and 75.32 ± 9.23% in V. For primary and secondary follicles values were respectively 94.80 ± 6.91% and 87.62 ± 17.12% for control, 86.8 ± 12.15% and 76.35 ± 26.34% for SF and 61.53 ± 14.78 and 52.25 ± 22.13% for V. There was no significant difference on the percentage of normal PAF among SF and the control. However, V presented a significantly lower percentage of normal PAF than the other two groups (P<0.05). The ultrastructure of bitch PAF was similar to that described for other species. After, SF follicles presented ultrastructural damage, while after V, primordial and primary follicles were well preserved. Secondary follicles, however, suffered many damages in both cryopreservation techniques. In conclusion, this work described the morphometric and ultrastructural characteristics and the population of bitch PAF. Vitrification was more effective in preserving the ultrastructure of primordial and primary follicles than slow freezing. Both methods are promising, but need improvement, especially concerning secondary follicles preservation.