Efeitos do chá de ayahuasca (Banisteriopsis caapi e Psychotria viridis) em modelos in vitro e in vivo de tumores

Abstract

O câncer é a principal causa de morte e uma importante barreira para o aumento da expectativa de vida em todos os países do mundo. Os tratamentos convencionais apresentam efeitos adversos consideráveis, sendo necessárias pesquisas para o desenvolvimento de novas terapias, e, nesse panorama, o chá de ayahuasca tem se destacado. A ayahuasca é uma infusão vegetal psicoativa da Amazônia que desde tempos remotos é preparado e tomado pelos índios como instrumento espiritual e ritual, de proteção e cura em diversas regiões do mundo. O chá de ayahuasca consiste, em geral, na combinação de duas plantas, feito por meio da decocção e infusão do cipó Banisteriopsis caapi (“mariri”) e das folhas da Psychotria viridis (“chacrona”). Sua composição química fundamental contém as β-carbolinas harmina (HRM), harmalina (HRL) e tetrahidroharmina (THH) presentes no mariri, enquanto a chacrona contém o alcalóide principal, o N, N-Dimetiltriptamina (DMT), substância molecular semelhante ao neurotransmissor serotonina (5-HT), com propriedades alucinógenas. Sendo assim, esse trabalho teve por objetivo investigar os efeitos da exposição ao chá ayahuasca em linhagens tumorais in vitro e em modelo experimental de tumor in vivo. O chá de ayahuasca, cedido pela UDV, foi quantificado por GC-MS/MS e utilizado nos ensaios in vitro e in vivo. Para os ensaios in vitro foram utilizadas as linhagens celulares: B16F10, U87MG, MCF7 e NIH3T3, que foram incubadas, plaqueadas e tratadas com diferentes doses de chá de ayahuasca ou tratadas com controle positivo ou controle negativo. Os ensaios de viabilidade celular e integridade da membrana celular foram realizados pelas técnicas: MTT e coloração com azul de tripan. Para avaliar a fragmentação do DNA, ciclo celular, viabilidade das células e perfil de morte celular foram realizados ensaios por citometria de fluxo (FACS) com protocolos bem definidos na literatura que envolvem o uso de iodeto de propídeo, RNAse e anexina V. Os ensaios in vivo foram realizados com camundongos C57BL6, que foram inoculados com células de melanoma, e tratados com ayahuasca ou controle positivo ou negativo por 10 dias consecutivos. 48 horas após o último tratamento os animais foram eutanasiados com dose letal de anestésicos, o sangue foi retirado para análises hematológicas e bioquímicas, os órgãos de tumores foram coletados para análises macroscópicas e histológicas. Nos testes in vitro, os resultados de viabilidade celular após incubação por 24 horas com chá de ayahuasca em diferentes doses, promoveu para a linhagem tumoral B16F10 redução da viabilidade celular correlacionada ao aumento da dose de tratamento que se tornou significativa a partir de 1 mg/mL à 5 mg/mL, esse grupo celular se mostrou mais sensível ao tratamento, já que, na maior dose apresentou menor viabilidade e, a partir desse resultado, seguimos para os ensaios em animais com esse tipo celular. A linhagem tumoral U87MG apresentou tendência de redução da viabilidade nas menores doses de tratamento, que foi significativa nas doses de 0,5; 1; 2,5 e 3,5 mg/mL. Curiosamente com o aumento da dose de tratamento para 4 mg/mL houve aumento significativo da viabilidade celular. A linhagem tumoral MCF7 houve redução significativa da viabilidade celular nas doses de 1; 3,5 e 5 mg/mL. O tratamento com o chá de ayahuasca para a linhagem não-tumoral NIH3T3, promoveu aumento na viabilidade celular quando as células foram tratadas com as menores doses, que foi revertida, a partir da dose de 1 mg/mL e iniciou-se uma acentuada redução na viabilidade celular. O grupo controle positivo, no geral, apresentou redução significativa da viabilidade celular nas maiores doses de tratamento. A partir dos resultados dos testes de viabilidade celular foi calculado o IC50 de cada linhagem celular: B16F10 IC50 é 1 mg/mL; U87MG o IC50 é 1,5 mg/mL; NIH3T3 e MCF7 o IC50 é 2,5 mg/mL. Nos testes de integridade da membrana celular o IC50 do chá de ayahuasca promoveu tendência de comprometimento das membranas celulares em todas as linhagens testadas. Os resultados para os ensaios de citometria de fluxo o IC50 do chá de ayahuasca promoveu fragmentação do DNA em todas as linhagens celulares testadas, sendo o câncer de mama a linhagem mais sensível a esse tratamento. No ensaio de fases do ciclo celular a linhagem tumoral B16F10 promoveu parada do ciclo celular em G2. Nos ensaios que avaliaram perfil de morte celular, as células em necrose estavam aumentadas nos tratamentos com cisplatina e IC50 ,quando comparadas com o grupo controle, nas diferentes linhagens celulares, a exceção do câncer de mama. Já as mortes das células em apoptose tardia/necrose e apoptose precoce se mostraram amentadas em todas as linhagens testadas nos tratamentos com cisplatina e IC50 quando comparadas com o grupo controle. Em contrapartida as células viáveis estavam diminuídas. Nos testes in vivo, após a inoculação e crescimento do tumor de melanoma, os animais receberam oralmente as doses de 1X, 2X e 5X, uma vez ao dia, por 10 dias consecutivos. A partir do 13° dia de experimento, houve redução significativa do peso animal quando comparamos os grupos controles e o grupo de maior dose de tratamento, no 19° dia de experimento essa redução significativa da média dos pesos atingiu todos os grupos tratados com ayahuasca. Ainda que não significativo existe uma tendência de redução do volume tumoral nos animais tratados com o chá de ayahuasca. As análises do hemograma e bioquímica revelaram uma tendência de inflamação crônica, disfunção hepática e renal. O peso dos órgãos: pulmão, estômago, intestino e o tumor não apresentaram diferenças significantes entre os grupos experimentais. Os demais órgãos como cérebro, coração e fígado observou-se uma tendência de aumento do peso relativo dos animais tratados com ayahuasca, em contrapartida, houve uma tendência de diminuição do peso relativo do timo e peso absoluto do rim direito dos animais tratados com ayahuasca. O órgão que apresentou maior variação significativa dos resultados para peso foi o baço. Nas análises histológicas os achados mais relevantes foram relacionados à necrose tumoral que foram diminuídas com significância nos grupos tratados com ayahuasca com dose 2X e tratados com cisplatina quando comparados ao grupo controle. A morte neuronal foi maior nos grupos tratados com chá de ayahuasca e cisplatina do que no grupo controle. Ainda que os resultados in vitro para a linhagem tumoral de B16F10 tenham sido promissores não se refletiram em cura animal, porém alguns resultados direcionam a uma possível tendência terapêutica. Sendo assim, mais estudos são necessários para a complementação dos dados apresentados em busca de doses que possam efetivamente apresentar efeito terapêutico in vivo.