Otimização da entrega e da apresentação de anticorpos anti-cd3 na levedura Saccharomyces boulardii para aplicação em bioterapias orais

Abstract

Desenvolvemos uma plataforma de bioterapia baseada na levedura Saccharomyces boulardii geneticamente modificada para expressar um fragmento variável de cadeia única (scFv) anti-CD3 ancorado à parede celular, combinando o perfil probiótico do microrganismo com a atividade imunossupressora do anticorpo para aplicação em terapias orais. Foram construídos e caracterizados sistemas de expressão baseados em vetores epissomais 2µ e em vetores integrativos mediados por elementos Ty. O sistema integrativo apresentou desempenho superior em todos os parâmetros avaliados, com eficiência de transformação 5 vezes maior em comparação ao sistema epissomal e níveis significativamente mais elevados de expressão heteróloga, com 95,6% das células produtoras versus 58,1% no sistema 2µ (p = 0,002). Adicionalmente, o vetor integrativo demonstrou elevada estabilidade genética ao longo de gerações sucessivas, sem evidências de perda do cassete de expressão ou de estresse metabólico associado. Visando otimizar a entrega oral do sistema, foi desenvolvido um encapsulamento lipídico à base de DOPA e colesterol (4:1), que promoveu aumento da viabilidade celular de 1,4 vezes em fluido gástrico simulado e de 1,8 vezes em fluido intestinal simulado in vitro. Na validação do delivery in vivo por imageamento de fluorescência em camundongos BALB/c, o encapsulamento aumentou em pelo menos três vezes o tempo de detecção da proteína heteróloga repórter em comparação ao controle não encapsulado. Em conjunto, os resultados estabelecem S. boulardii como uma plataforma robusta para expressão constitutiva estável e para entrega oral de fragmentos de anticorpos. Estudos futuros deverão concentrar-se na aplicação desse sistema terapêutico em modelos experimentais de doenças inflamatórias.