Análise de viabilidade celular e expressão de miR-671 em modelo in vitro de neurodegeneração dopaminérgica induzida por MPP+

Abstract

A Doença de Parkinson (DP) é uma enfermidade neurodegenerativa progressiva caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos na substância negra e pela presença de corpos de Lewy, resultando em comprometimentos motores, cognitivos e emocionais. MicroRNAs (miRNAs) têm sido apontados como importantes moduladores dos processos patológicos da DP, incluindo estresse oxidativo, neuroinflamação e apoptose neuronal. Dentre eles, miR-671 destaca-se por seu papel regulatório em vias neuro inflamatórias e na biologia neuronal. Esta dissertação investigou os efeitos das neurotoxinas MPP⁺ e rotenona sobre a viabilidade celular e a expressão de miR-671 em células SH-SY5Y, utilizando um modelo in vitro de neurodegeneração dopaminérgica. Ensaios de viabilidade celular foram realizados com os métodos MTT e CCK-8, avaliando diferentes concentrações das toxinas, tempos de exposição e densidades celulares, para comparar a extensão do dano induzido e validar as condições experimentais ideais para o ensaio CCK-8. A expressão de miR-671 foi quantificada por RT-qPCR em células expostas a MPP⁺, complementada por análises bioinformáticas para identificar possíveis vias celulares reguladas por esse microRNA. Os resultados indicaram redução significativa e dose-dependente da viabilidade celular após exposição a MPP⁺, observada tanto pelo método MTT quanto pelo CCK-8, confirmando a eficácia do modelo neurotóxico. A análise de expressão revelou aumento significativo do miR-671 em células tratadas com 1 mM de MPP⁺ por 24 horas, sugerindo possível envolvimento desse miRNA na resposta ao insulto neurotóxico e potencial papel neuroprotetor. A investigação dos alvos gênicos de miR-671-5p, por meio de abordagem integrativa combinando predição computacional e dados validados experimentalmente, resultou em uma lista de 28 genes. A análise funcional via DAVID evidenciou 18 clusters significativos relacionados a processos como regulação da longevidade celular, sinalização via receptores acoplados à proteína G, desenvolvimento celular, modificação lipídica de membranas, regulação transcricional e modificações pós-traducionais. Esses dados indicam que miR-671-5p pode influenciar múltiplos processos celulares essenciais, incluindo homeostase energética e mecanismos associados à fisiopatologia da DP. Em síntese, o estudo destaca a importância da padronização das metodologias para análise da viabilidade celular em modelos de neurodegeneração e evidencia que a expressão aberrante do miR-671 está associada à injúria dopaminérgica. Por atuar em diversas vias celulares, miR-671 pode representar um biomarcador e alvo terapêutico promissor na Doença de Parkinson. Esses achados reforçam a relevância dos miRNAs no entendimento e tratamento dessa enfermidade, abrindo caminho para futuras investigações.