Avaliação da resposta imune em células pulpares senescentes e não senescentes e a busca por peptídeos senoterapêuticos

Abstract

A senescência celular é caracterizada pela interrupção irreversível do ciclo celular, acompanhada de alterações morfológicas, metabólicas, lisossomais e nos fatores de secreção. Embora tenha evoluído inicialmente como um mecanismo para limitar a proliferação de células envelhecidas ou danificadas, a senescência contribui para o envelhecimento, resultando em doenças relacionadas à idade e na diminuição das funções celulares. Essas alterações também impactam as células da polpa dentária, prejudicando suas funções defensivas e sensoriais, podendo comprometer o sucesso de tratamentos endodônticos conservadores. Este trabalho foi dividido em 3 capítulos. No capítulo 1, buscamos explorar de maneira aprofundada a senescência no contexto da odontologia, com foco no complexo dentino-pulpar, através de uma revisão de literatura com elementos e análises bibliométricas. A pesquisa também explora a literatura científica para identificar produtos odontológicos que induzem senescência celular. Além disso, o estudo discute potenciais estratégias para mitigar os efeitos da senescência. Nosso estudo conclui que, apesar do aumento nas pesquisas sobre senescência no complexo dentino-pulpar, o tema ainda exige maior exploração. É crucial acelerar e aprofundar estudos para identificar produtos que induzam ou mitiguem a senescência, traduzindo esse conhecimento em soluções clínicas eficazes. O capítulo 2 teve como objetivo avaliar a morfologia, migração, proliferação, viabilidade celular e a resposta imune de células da polpa dentária humana em senescência e sob estimulação inflamatória. Inicialmente, a senescência foi induzida com doxorrubicina e confirmada por coloração de β-galactosidase. Para simular uma resposta inflamatória in vitro, utilizou-se lipopolissacarídeo (LPS) e interferon-gama (IFN-γ). As alterações morfológicas foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura. A proliferação e a viabilidade celular foram avaliadas por exclusão com azul de tripano, enquanto a capacidade de migração celular foi determinada pelo método scratch. A resposta imune foi investigada por meio da expressão de genes de citocinas pró-inflamatórias, como indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 6 (IL-6), e citocinas anti-inflamatórias, como IL- 10 e fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1), utilizando ensaio de qPCR. Os resultados demonstraram que células senescentes apresentaram maior tamanho, menor número de prolongamentos, redução na migração, proliferação e viabilidade, além de aumento na expressão de IDO, TNF-α e IL-6. A expressão de TGF-β1 foi reduzida no grupo tratado com LPS, enquanto a expressão de IL-10 apresentou aumento sem significância estatística. O capítulo 3 avaliou o potencial senoterapêutico de uma biblioteca de 15 peptídeos desenhados por inteligência artificial. Para isso, uma biblioteca de peptídeos, sintetizados após design in silico, foi avaliada antes e após a indução da senescência com doxorrubicina. A triagem dos peptídeos foi realizada por coloração de β-galactosidase, enquanto a viabilidade celular foi analisada pelo ensaio MTT, e a produção de óxido nítrico (NO) foi mensurada pelo método de Griess. Dentre os peptídeos testados, dois peptídeos apresentaram bons potenciais, sendo eles C3 e C10, por apresentarem boa viabilidade celular mesmo em altas concentrações, redução da marcação por β-galactosidase e níveis de produção de nitrito próximos a condição basal. De modo geral, os resultados do nosso estudo indicam a presença de inflamação exacerbada associada à imunossupressão, comprometendo o potencial reparador das células pulpares senescentes, além de redução da migração e proliferação celular. Nesse contexto, a senescência celular pode influenciar negativamente o prognóstico de tratamentos endodônticos conservadores, prejudicando funções celulares essenciais para sua eficácia. Em adição, também foram observados que vários produtos utilizados no contexto do complexo dentino pulpar apresentam potencial para indução de senescência pulpar. Desta forma, a busca por novas drogas com potencial senoterapêutico surge, como uma alternativa promissora para mitigar os efeitos da senescência na polpa dentária. Neste sentido, os peptídeos mais promissores nesta análise inicial serão avaliados em testes futuros.