Avaliação do papel de opsoninas e vias de internalização de Cryptococcus neoformans na expressão de genes envolvidos na interação do fungo com macrófagos

Abstract

A criptococose é uma doença oportunista causada pelo fungo encapsulado Cryptococcus neoformans, que acomete principalmente indivíduos imunocomprometidos. A principal característica de C. neoformans é sua cápsula polissacarídica, um fator de virulência fundamental que mascara padrões moleculares associados a patógenos na parede celular do fungo. Essa cápsula dificulta o reconhecimento eficiente pelo sistema imunológico, reduzindo a fagocitose e outras respostas microbicidas. Em condições in vitro, a fagocitose de C. neoformans é extremamente baixa na ausência de opsoninas, como anticorpos ou moléculas do sistema complemento. Apesar de os macrófagos desempenharem um papel crucial na resposta imune ao fungo, eles podem atuar como hospedeiros intracelulares, permitindo a replicação do patógeno. Este estudo teve como objetivo investigar a expressão gênica de macrófagos murinos em resposta à internalização de Cryptococcus neoformans opsonizado com complemento ou anticorpos monoclonais anti-GXM, para compreender melhor o papel dessas opsoninas na resposta imune à criptococose. Foram analisadas vias de internalização mediadas por receptores de fragmento de região cristalizável e receptores do complemento dos macrófagos, avaliando o efeito do bloqueio dessas vias com anticorpos específicos em ensaios de fagocitose. Observou-se que o bloqueio nas condições utilizadas reduziu apenas parcialmente a internalização do fungo. Subsequentemente, ensaios de interação foram realizados com macrófagos expostos a células de C. neoformans opsonizadas com soro de cobaia ou com o anticorpo monoclonal anti-glucuronoxilomanana, polissacarídeo principal presente na cápsula do fungo. Após duas horas de infecção, os macrófagos foram coletados para extração de RNA e análise da expressão gênica por RT-qPCR, focando na ativação de genes relacionados à resposta imunológica ao fungo. Os resultados não demonstraram alterações significativas na expressão de 12 genes associados à resposta imunológica de macrófagos, tanto em comparação ao controle não opsonizado quanto entre as amostras opsonizadas com soro ou anticorpo. Esses achados sugerem que diferenças na resposta imunológica mediada por essas duas opsoninas podem ser mais sutis, indicando a necessidade de investigar outros genes e tempos de interação para compreender melhor as possíveis diferenças mediadas por diferentes opsoninas na interação fungo-macrófago.