Skip navigation
Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.unb.br/handle/10482/39069
Files in This Item:
File Description SizeFormat 
2020_KaioLuísdaSilvaBentes.pdf2,26 MBAdobe PDFView/Open
Title: Produção de proteínas salivares de triatomíneo utilizando sistemas de expressão procarioto e eucarioto.
Authors: Bentes, Kaio Luis da Silva
Orientador(es):: Charneau, Izabela Marques Dourado Bastos
Coorientador(es):: Araújo, Carla Nunes de
Assunto:: Rhodnius neglectus
Iinibidor de protease
Triabina
Serino protease
Odorant binding protein
Anticoagulante
Citation: BENTES, Kaio Luis da Silva. Produção de proteínas salivares de triatomíneo utilizando sistemas de expressão procarioto e eucarioto. 2020. 87 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.
Abstract: O Rhodnius neglectus é um inseto hematófago, sendo vetor da doença de Chagas tendo a sua ampla distribuição no cerrado. Para garantir o sucesso do repasto sanguíneo, esses insetos possuem algumas estratégias para contrapor o sistema hemostático do hospedeiro. Desta forma, na saliva desses animais podem ser encontradas moléculas farmacologicamente ativas, como anticoagulantes, antiplaquetárias e vasodilatadoras. O objetivo desse trabalho foi produzir proteínas salivares de R. neglectus em sistemas heterólogos procarioto e eucarioto e avaliar sua capacidade para inibir a coagulação sanguínea. Desta forma, foram selecionados 4 transcritos do transcritoma de R. neglectus, os quais foram clonados no vetor pET100/D-TOPO® ou pFastBac1TM. O inibidor de serino protease do tipo Kazal (RnKazalSPI) foi expresso tanto em sistema procarioto, sendo identificado apenas na fração solúvel, quanto em eucarioto, porém neste último foi possível detectar sua expressão, por western blot, na linhagem Tn5B. Uma serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) também foi expressa em sistema eucarioto. A proteína de ligação a odorantes (RnOBP) foi expressa em ambas as frações bacterianas, porém ainda não foi possível purificar a proteína da fração solúvel. A triabina (RnTriabin), embora também tenha sido detectada em ambas as frações bacterianas, foi purificada a partir de corpos de inclusão. Das quatro proteínas, duas (RnKazalSPI e RnTriabin) foram efetivamente expressas em bactérias, purificadas e testadas quanto à sua capacidade para inibir a coagulação sanguínea. Entretanto, não apresentaram atividade anticoagulante nos ensaios realizados.
Abstract: Rhodnius neglectus is a hematophagous insect and Chagas disease vector and it is widely distributed in the Brazilian savannah. To ensure the success of the blood meal, these insects have some strategies to counter host homeostasis. Thus, its saliva may have pharmacologically active molecules as anticoagulants, antiplatelets, and vasodilators. This study aimed to express R. neglectus salivary proteins in prokaryote and eukaryote systems and to evaluate the capacity to inhibit blood clotting. Thus, four transcripts were selected from R. neglectus transcriptome, and they were cloned into pET100/D-TOPO® or pFastBac1TM. A Kazal- type serine protease inhibitor (RnKazalSPI) was expressed in both the prokaryotic system, being identified only in the soluble fraction, and in the eukaryotic, however, in the latter, it was not detected by western blot in the Tn5B cell line. A trypsin-like serine protease (RnTrypsin) was also expressed in the eukaryotic system. An odorant-binding protein (RnOBP) was detected in both bacterial fractions, but it has not been possible to purify the protein from the soluble fraction yet. A triabin (RnTriabin), although also detected in both bacterial fractions, was purified from inclusion bodies. Out of the four proteins, two (RnKazalSPI and RnTriabin) were effectively expressed in bacteria, purified and tested for their ability to inhibit blood clotting. However, they did not show anticoagulant activity in this study.
Description: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2020.
Licença:: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Agência financiadora: FAPDF, CAPES e CNPq
Appears in Collections:FMD - Mestrado em Patologia Molecular (Dissertações)

Show full item record Recommend this item " class="statisticsLink btn btn-primary" href="/handle/10482/39069/statistics">



Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.