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Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.unb.br/handle/10482/38269
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Title: Estudo comparativo da associação entre o peptídeo de defesa do hospedeiro IDR1002 e ciprofloxacino em culturas de células pulpares humanas
Authors: Martins, Danilo César Mota
Orientador(es):: Rezende, Taia Maria Berto
Coorientador(es):: Franco, Octávio Luiz
Assunto:: polpa dentária
células-tronco
imunomodulação
biotecnologia
Issue Date: 26-Jun-2020
Citation: MARTINS, Danilo César Mota. Estudo comparativo da associação entre o peptídeo de defesa do hospedeiro IDR1002 e ciprofloxacino em culturas de células pulpares humanas. 2019. 113 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.
Abstract: O avanço da biotecnologia tem proporcionado significantes mudanças no âmbito da engenharia tecidual e com isso terapias regenerativas como a revascularização pulpar vem ganhando espaço na endodontia no tratamento de dentes permanentes imaturos. Porém, o uso das pastas antibióticas difundidas para técnica de revascularização e a imprevisibilidade da concentração de células tronco aprisionadas no coágulo sanguíneo podem afetar o processo de neoformação tecidual. Diante disto, novos protocolos têm sido estudados para aprimoramento da técnica. Por outro lado, os peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) podem apresentar atividade antimicrobiana, imunomodulatória e regenerativa, surgindo como uma opção para a revascularização pulpar, podendo atuar de forma isolada ou em combinação com outras biomoléculas. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar a resposta das células pulpares na presença da associação sinérgica composta por um peptídeo de defesa do hospedeiro, o IDR-1002 e o antibiótico ciprofloxacino, um dos componentes da pasta duplo antibiótica (DAP), atualmente utilizada nos protocolos de revascularização pulpar. Para tanto, foi analisado inicialmente o perfil fenotípico das células presentes no ambiente apical do elemento dental – células da polpa, células do ligamento periodontal e células da papila apical, por citometria de fluxo. Em sequência, foi avaliado a migração e proliferação das células pulpares na presença da associação entre o peptídeo e o antibiótico. Para avaliação da produção de citocinas, diversas situações experimentais foram estabelecidas: condições clássicas de resposta a infecção (na presença de LPS) e de resposta imunoinflamatória (na presença de LPS com IFN-), assim como situações de resposta a infecção antígeno específica (na presença de HK-E. faecalis e HK-S. aureus). Nestas situações, a citotoxicidade e a produção de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias das células pulpares foram analisadas. A citotoxicidade foi avaliada pelo método de MTT e a expressão de citocinas, por qPCR. O perfil fenotípico demonstrou marcação superior a 97% para os marcadores positivos para células-tronco mesenquimais (CTMs) e inferior à 1%, para o coquetel de marcadores negativos para células pulpares, as quais foram eleitas para serem utilizadas nos experimentos seguintes. As células pulpares apresentaram aumento na capacidade migratória e proliferativa nos grupos expostos ao peptídeo IDR-1002 e à combinação sinérgica após 24 e 48h. Após 24h, observou-se ausência de citotoxicidade em todas as situações propostas e na presença de todos os grupos experimentais. A avaliação das citocinas, após 24h, demonstrou que a presença da associação sinérgica levou a redução significativa da expressão dos genes TNFRSF-1, IL-1β, IL-8 IL-6 e IL-10. Em suma, a associação sinérgica entre o peptídeo IDR- 1002 e o ciprofloxacino apresentou potencial imunomodulatório favorável, surgindo como uma opção promissora para os processos de revascularização pulpar.
Abstract: The advance of biotechnology has brought significant changes in the field of tissue engineering and regenerative therapies. Thus, pulp revascularization has been gaining ground in endodontics in the treatment of immature permanent teeth. However, the use of diffused antibiotic pastes for revascularization technique and the unpredictability of the concentration of trapped stem cells in the blood clot may affect the process of tissue neoformation. Given this, new protocols have been studied to improve the technique. On the other hand, host defense peptides (PDHs) may have antimicrobial, immunomodulatory and regenerative activity, appearing as an option for pulp revascularization and may act alone or in combination with other biomolecules. Thus, the aim of this study is to evaluate the response of pulp cells in the presence of the synergistic association composed of a host defense peptide, the IDR-1002 and the ciprofloxacin antibiotic, one of the components of the double antibiotic paste (PAD), currently used in pulp revascularization protocols. For this purpose, the phenotypic profile of cells presents in the apical environment of the dental element - pulp cells, periodontal ligament cells and apical papilla cells was analyzed by flow cytometry. Following, pulp cell migration and proliferation were evaluated in the presence of the association between the peptide and the antibiotic. To evaluate cytokine production, several experimental situations were established: classical conditions of infection response (in the presence of LPS) and immunoinflammatory response (in the presence of LPS with IFN-), as well as situations of response to specific antigen infection (in the presence of HK-E. faecalis and HK-S. aureus). In these situations, the cytotoxicity and the production of inflammatory and anti-inflammatory pulp cell cytokines were analyzed. Cytotoxicity was evaluated by the MTT method and cytokine expression by qPCR. The phenotypic profile demonstrated labeling greater than 97% for mesenchymal stem cell positive markers (MSCs) and less than 1% for pulp negative markers cocktail, which were elected for use in the following experiments. Increased pulp cells migration and proliferation were observed in groups exposed to IDR-1002 peptide and to the synergistic combination after 24 and 48h. After 24h, no cytotoxicity was observed in all proposed situations and in the presence of all experimental groups. After 24h, the presence of synergistic association led to significant reduction of TNFRSF-1, IL-1β, IL-8 IL-6 and IL-10 gene expression in pulp cells. In sum, the synergistic association between the IDR-1002 peptide and ciprofloxacin showed favorable immunomodulatory potential, emerging as a promising option for pulp revascularization processes.
Description: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2019.
Licença:: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Agência financiadora: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF).
Appears in Collections:FS - Mestrado em Ciências da Saúde (Dissertações)

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