Skip navigation
Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.unb.br/handle/10482/37265
Files in This Item:
File Description SizeFormat 
2019_MariahRibeiroRocha.pdf1,73 MBAdobe PDFView/Open
Title: Investigação dos componentes da pele do anuro Boana albopunctata (Spix, 1824) empregando abordagens moleculares e bioquímicas
Authors: Rocha, Mariah Ribeiro
Orientador(es):: Castro, Mariana de Souza
Assunto:: Anuro - secreções cutâneas
Boana albopuctata
Microrganismos patogênicos
Peptídeos antimicrobianos
Purificação
Issue Date: 31-Mar-2020
Citation: ROCHA, Mariah Ribeiro. Investigação dos componentes da pele do anuro Boana albopunctata (Spix, 1824) empregando abordagens moleculares e bioquímicas. 2019. xiv, 56 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.
Abstract: Peptídeos antimicrobianos (PAMs) vêm ganhando cada vez mais destaque no cenário científico atual como uma alternativa na luta contra microrganismos patogênicos resistentes a múltiplos antibióticos (ATBs). O presente estudo teve como objetivo geral investigar a secreção cutânea do anuro Boana albopunctata empregando uma abordagem combinada de técnicas de biologia molecular e de química de peptídeos. A tradução in silico dos cDNAs obtidos indicou 14 precursores diferentes, permitindo a identificação do precursor do PAM Hilina-a1, previamente isolado dessa secreção. Esta técnica foi utilizada em paralelo com técnicas clássicas de bioquímica que permitiram o isolamento e a caracterização de um PAM inédito presente na secreção cutânea de B. albopunctata. A secreção cutânea obtida por meio de estimulação elétrica foi fracionada por RP-HPLC. Três frações apresentaram atividade antimicrobiana acentuada sobre a bactéria Gram-positiva Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Estas frações foram analisadas por MALDI-TOF MS. Tal análise permitiu a identificação de dois PAMs já isolados dessa secreção: a Hilina-a1 e a Ceratotoxina-Ha (Ctx-Ha). O terceiro componente identificado é um peptídeo antimicrobiano inédito com massa molecular de 2981,8 Da. Este é constituído por 28 resíduos de aminoácidos (1 FLGAILRIGQALAKTVIPLVTNAIHPKQ28) e se assemelha ao peptídeo antimicrobiano Figainina 2, identificado com o emprego da estratégia de clonagem de cDNAs da pele do anuro Boana raniceps. O novo peptídeo isolado foi nomeado como Figainina 2-Ba e apresentou um amplo espectro antimicrobiano, incluindo atividade sobre bactérias de interesse veterinário, a bactéria Gram-negativa Escherichia coli e a Gram-positiva Staphylococcus aureus, ambos de isolados clínicos veterinários, com valores de CIM iguais a 8 e 32 μM, respectivamente. Além disso, o PAM Figainina 2-Ba apresentou atividade antifúngica contra Candida albicans ATCC 14053 e Cryptococcus neoformans H99 com valores de CIM iguais a 16 e 8 μM, respectivamente. Estes resultados sugerem o PAM Figainina 2-Ba como um bom candidato para o desenvolvimento de novos medicamentos. No presente estudo, também foram avaliados os efeitos antimicrobianos de cinco análogos do PAM Ceratotoxina-Ha, um PAM também identificado na secreção de B. albopunctata. Dentre os análogos do PAM Ctx-Ha, o análogo Ctx Ha-A3 demonstrou boa capacidade antimicrobiana com valores de CIM iguais a 4 μM contra as bactérias multirresistentes de interesse veterinário, indicando ser um promissor agente terapêutico no tratamento dessas afecções. Os resultados deste trabalho enfatizam a importância da combinação de clonagem de cDNAs e estratégias clássicas de purificação de peptídeos, o que permitiu uma melhor compreensão do conjunto de peptídeos presentes na pele do anuro estudado.
Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) have been gaining increasing prominence in the current scientific scenario as an alternative in the fight against pathogenic microorganisms resistant to multiple antibiotics (ATBs). The present study aimed to investigate the cutaneous secretion of the anuran Boana albopunctata using an approach combining molecular biology and chemistry of peptides techniques. The in silico translation of the obtained cDNAs indicated 14 different precursors, allowing the identification of the precursor of the AMP Hylin a1, previously isolated from this secretion. This technique was used in parallel with the classic techniques of biochemistry that allowed the isolation and characterization of a novel AMP present in the cutaneous secretion of B. albopunctata. Cutaneous secretion obtained by electrical stimulation was fractionated by RP-HPLC. Three fractions showed marked antimicrobial activity on Gram-positive Staphylococcus aureus (ATCC 25923). These fractions were analyzed by MALDI-TOF MS. This analysis allowed the identification of two previously isolated AMPs from this secretion: Hylin-a1 and Ceratotoxin-Ha (Ctx-Ha). The third identified component is a novel antimicrobial peptide with a molecular mass of 2,981.8 Da. This peptide consists of 28 amino acid residues ( 1 FLGAILRIGQALAKTVIPLVTNAIHPKQ28) and resembles the antimicrobial peptide Figainin 2, identified using the cloning strategy of cDNAs of the skin of the anuran Boana raniceps. The new isolated peptide was named as Figainin 2-Ba and presented a broad antimicrobial spectrum, including activity on bacteria of veterinary interest, Gram-negative Escherichia coli and Gram-positive Staphylococcus aureus, both veterinary clinical isolates, with MIC values of 8 and 32 μM, respectively. In addition, AMP Figainin 2-Ba showed antifungal activity against Candida albicans ATCC 14053 and Cryptococcus neoformans H99 with MIC values of 16 and 8 μM, respectively. These results suggest the AMP Figainin 2-Ba as a good candidate for the development of new drugs. The antimicrobial effects of five AMP analogs of Ceratotoxin-Ha, an AMP also identified in the B. albopunctata secretion, were also evaluated in the present study. Among the analogs of Ctx-Ha, the analog Ctx-Ha-A3 demonstrated good antimicrobial capacity with MIC values of 4 μM against multiresistant bacteria of veterinary interest, indicating to be a promising therapeutic agent in the treatment of these affections. The results of this work emphasize the importance of the combination of cDNA cloning and classical strategies of peptide purification, which allowed a better understanding of the set of peptides in the skin of the studied anuran.
Description: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2019.
Agência financiadora: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
Appears in Collections:IB - Mestrado em Biologia Animal (Dissertações)

Show full item record Recommend this item " class="statisticsLink btn btn-primary" href="/handle/10482/37265/statistics">



Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.