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Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.unb.br/handle/10482/35077
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Title: PD-L1 pode mediar a exaustão de células T em um caso de leishmaniose cutâneo difusa causada pela Leishmania (L.) Amazonensis
Authors: Barroso, Daniel Holanda
Orientador(es):: Sampaio, Raimunda Nonata Ribeiro
Assunto:: Leishmaniose cutânea
Exaustão celular
Biomarcadores
Anticorpos
Imunologia
Issue Date: 12-Jul-2019
Citation: BARROSO, Daniel Holanda. PD-L1 pode mediar a exaustão de células T em um caso de leishmaniose cutâneo difusa causada pela Leishmania (L.) Amazonensis. 2019. 190 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.
Abstract: Introdução: A leishmaniose cutâneo difusa é uma forma rara da leishmaniose tegumentar americana associada à infecção pela Leishmania (L.) amazonensis no Brasil. Representando o polo anérgico da Leishmaniose tegumentar americana, mas explicações para a sua resistência ao tratamento ainda são obscuras. Objetivos: Investigar o papel da via PD1/PD-L1 na exaustão celular da leishmaniose cutâneo difusa causada por Leishmania (L.) amazonensis, através de experimento ex vivo e in vitro após 48h de estímulo com o antígeno de Leishmania (L.) amazonensis. Métodos: A definição do caso de leishmaniose cutânea difusa foi realizado de acordo com os critérios clínicos, laboratoriais e histopatológicos presentes na literatura e através da identificação da espécie de Leishmania responsável. Clinicamente o sujeito apresentava placa eritematosa elevada em dorso nasal de crescimento lento e que surgiu durante viagem à região Amazônica, a imunofluorescência indireta e a intradermo reação de Montenegro foram negativas, a cultura e o exame direto da lesão foram positivos para Leishmania spp. A reação em cadeia da polimerase ITS1PCR identificou Leishmania (L.) amazonensis. O sangue periférico do sujeito da pesquisa foi colhido para o experimento 11 meses após o início do tratamento, quando o mesmo já não apresentava lesão clinicamente evidente. A células mononucleares de sangue periférico foram analisadas ex vivo e in vitro após 48 horas de estimulação com antígeno solúvel de Leishmania (L.) amazonensis. As células foram marcadas para proteínas de superfície celular possivelmente envolvidas na patogênese da leishmaniose cutânea difusa, segundo estudos anteriores [CD14, CD40, CD44, CD80, ligante da proteína de morte celular programada 1 (PD-L1), HLA-DR, CD86, CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD45RA, e CD25], bem como para as moléculas intracelulares interferon gama e granzima B e para marcadores de morte celular. Foi realizada revisão narrativa da literatura de forma a correlacionar os achados do estudo aos já descritos por outros trabalhos. Resultados: A análise das moléculas de superfície mostrou expressão de PD-L1, um ligante inibitório, nos monócitos estimulados com o antígeno solúvel de Leishmania (65% das células), enquanto em monócitos não estimulados (controle negativo), esta molécula foi expressa em apenas 35% das células. Por outro lado, observamos uma diminuição de linfócitos CD4+IFN-γ+ (8.32% versus 1.7%) e de linfócitos CD8+ IFN-γ+ (14% versus 1%), quando comparamos as células estimuladas com o controle negativo. Um decréscimo relevante na expressão de granzima B em células T CD8+ após o estímulo com o antígeno solúvel de Leishmania também foi observado, estando presente em 31% no controle negativo, mas somente em 5% no grupo que recebeu o estímulo. A expressão de moléculas coestimulatórias CD40 e CD86 foi semelhante entre as células que receberam o estímulo do SLA e o controle negativo. Conclusão: A ativação da via inibitória PD-L1 após a reestimulação com o antígeno de Leishmania pode estar relacionada a expressão diminuída de IFN-γ em linfócitos T CD8+ e CD4+, e de granzima B em linfócitos T CD8+. A ativação desta via inibitória é uma das hipóteses para explicar a falta de resposta ao tratamento de paciente com leishmaniose difusa ou LCD.
Abstract: Introduction: Diffuse Cutaneous Leishmaniasis (DCL) is a rare disease form associated with L. (L.) amazonensis in South America. It represents the “anergic” pole of American Tegumentary leishmaniasis and the explanation for its resistance to treatment remains elusive. Objectives: Investigate role of PD-1/PD-L1 pathway in the cellular exhaustion of diffuse cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (L.) amazonensis thought an ex-vivo and in vivo experiment after 48hs stimulation with Leishmania (L.) amazonensis antigen. Objetivos: Investigar o papel da via PD1/PD-L1 na exaustão celular da leishmaniose cutâneo difusa causada por Leishmania (L.) amazonensis através de experimento ex vivo e in vitro após 48h de estímulo com o antígeno de Leishmania (L.) amazonensis. Methods: The definition of diffuse leishmaniasis in the subject was made thought clinical, laboratorial, histopathological criteria reported in the literature and thought the identification of the responsible Leishmania species. Clinically the subject presented with a slow growing elevated erythematous plaque in the dorsum nasi that appeared during a trip to the amazonian region, indirect immunofluorescence was negative, Montinegro’s skin reaction was negative, culture and direct examination of the lesion were positive for Leishmania spp. Polimerase chain reaction ITS1PCR identified Leishmania (L.) Amazonensis. Subjects periferal blood was colected for the experiment 11 months after treatment begining, and he no longer presented with clinical evident lesion at this time. Peripheral blood mononuclear cells were analyzed ex vivo and in vitro after 48h of stimulation with soluble L. (L.) amazonensis antigen. The cells were labeled for cells surface proteins possibly involved in the pathogenesis of diffuse leishmaniasis according to previous studies [CD14, CD40, CD44, CD80, Programed death ligand 1 (PD-L1), HLA-DR, CD86, CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD45RA, e CD25] as well as for intracellular molecules IFN-γ and granzyme B and for cell death markers. Their positivity the markers was evaluated with the use of flow cytometry. The immunological findings were compared to the existent in the literature though a narrative review. Results: We observed increased expression of PD-L1, a inhibitory ligand, in monocytes stimulated with soluble leishmania antigen(in 65% of cells), when in the unstimulated monocytes(negative controls), it was expressed in only 35% of cells. Conversely, the expression of CD4+IFN-γ+ in T lymphocytes (8.32% versus 1.7%) and CD8+ IFN-γ+ in T lymphocytes (14% versus 1%) decreaced when compared with negative controls. A relevant decrease in the granzyme B expression in the CD8+T cells after the stimulation with soluble leishmania antigen was also observed, being present in 31% in the negative controls but in only 5% in the group that received the stimulus. There was a similar expression of costimulatory molecules CD40 and CD86 between the cells that received the SLA stimulus and the negative control. Conclusion: The activation of PD-L1 inhibitory pathway after Leishmania antigen stimulation could be related to the reduced levels of IFN-γ in CD8+ and CD4+ T cells and granzyme B in CD8+ T cells. The activation of this inhibitory pathway is one of the hypotheses to explain the lack of response to conventional treatment in a patient with diffuse leishmaniasis.
Description: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2019.
Licença:: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Appears in Collections:FS - Mestrado em Ciências da Saúde (Dissertações)

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