Análise de mirnas circulantes identificados em pacientes com carcinoma de células escamosas em cavidade oral e orofaringe

Abstract

Introdução O Carcinoma de Células Escamosas (CCE) é responsável pela maioria dos casos de câncer na cavidade oral e/ou orofaringe e devido a sua elevada taxa de incidência e mortalidade é considerado um grande problema de saúde pública, com desafios distintos de diagnóstico e tratamento. Neste estudo, identificamos miRNAs circulantes associados ao CCEem cavidade oral e orofaringe, investigamos seus níveis de expressão in silico, previmos seus genes-alvos e identificamos as vias biológicas que eles regulam.Métodos e Resultados A técnica RNA-seq para identificação total de miRNAs (miRNoma) foi aplicada em 16 amostras de plasma, sendo 12 de pacientes antes de iniciar qualquer tratamento, 02 coletadas após a radioterapia desse mesmo grupo de pacientes e 02 do grupo controle. Após a aplicação dos critérios de seleção de miRNAs, foi possível identificar um total de 444miRNAs do experimento de miRNoma, sendo 339 miRNAs detectados no grupo de casos (262 em indivíduos antes da iniciar qualquer tratamento e 77 em indivíduos após radioterapia) e 105 no grupo controle. As análises de bioinformática, usando amostras independentes de bancos de dados públicos, permitiram a identificação de seis miRNAs significativamente associados aoCCE em cavidade oral e orofaringe: miR-30d-5p, miR-122-5p, miR-126-3p, miR-150-5p, miR 191-5p e miR-223-3. Nas plataformas de predição TargetScan e miRDB, foram identificados um total de 194 genes-alvo, previstos para estes miRNAs. Posteriormente, uma análise funcional desses genes, realizada pela ferramenta DAVID, destacou vias e anotações com enriquecimento significativo. Entre eles, a via microRNAs no câncer, pela KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) se mostrou enriquecida. Pela GO (Gene Ontology), estavam enriquecidas as anotações do núcleo (Compartimento Celular), ligação às proteínas (Função Molecular) e regulação negativa da transcrição modelada pelo DNA (Processo Biológico). Além disso, a análise da Rede de Interação Proteína-Proteína com STRING e Cytoscape permitiu a identificação de proteínas relevantes para a doença estudada: PRKCA, RRAS2, RASA1, CALML4, PAX5 e FOXO1.Conclusão Nosso experimento de miRNoma, a predição in silico de genes-alvo, análises funcionais e construção da rede PPI para miRNAs específicos destacaram o miR-150-5p e o miR-223- 3p como miRNAs associados ao CCE de cavidade oral e de orofaringe, fornecendo informações importantes sobre como eles podem modular a expressão e a função dos genes nesta doença. Estes resultados estabelecem as bases para futuras investigações, incluindo estudos para validar o potencial destes miRNAs como biomarcadores de diagnóstico ou prognóstico, ou como alvos para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas.