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Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unb.br/handle/10482/3641
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Title: Análise proteômica de coração de Gallus gallus com seqüências de minicírculos de kDNA de Trypanosoma cruzi integradas no genoma
Authors: Coelho, Fábio de Araújo Schwartz
Orientador(es):: Sousa, Marcelo Valle de
Assunto:: Chagas, Doença de
Genética
Issue Date: 13-Feb-2010
Citation: COELHO, Fábio de Araújo Schwartz. Análise proteômica de coração de Gallus gallus com seqüências de minicírculos de kDNA de Trypanosoma cruzi integradas no genoma. 2007. 66 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2007.
Abstract: Análises proteômicas foram realizadas a fim de se verificar a ocorrência de modificações na expressão protéica em corações de Gallus gallus (galo doméstico) submetidos a integração em seu genoma de DNA cinetoplástico (kDNA) de Trypanosoma cruzi. Foram utilizados galos, que são aves naturalmente refratárias à infecção por células de T. cruzi, contendo o kDNA integrado em seu genoma através da inoculação do parasito nos estágios iniciais do desenvolvimento. O controle negativo foram aves sem nenhum contato com o protozoário. Extratos de tecidos de corações nessas duas condições (kDNA positivo e kDNA negativo) foram comparados por eletroforese bidimensional em busca de proteínas condição-específicas ou diferencialmente expressas. Foram selecionadas quatro manchas para identificação, sendo duas exclusivas da amostra de galo com integração positiva e duas presentes em ambas condições, como controle positivo da técnica. Através da impressão digital do mapa peptídico (PMF), foram identificadas três manchas: proteína C-reativa, cadeia leve 3 de miosina e actina cardíaca. A primeira desempenha um importante papel no sistema imune hospedeiro, sendo, inclusive, relacionada com inflamação e cardiomiopatias. A quarta mancha protéica não rendeu identificação conclusiva. Não foi possível ainda relacionar diretamente a diferença de expressão protéica com a integração do kDNA no genoma hospedeiro. A continuidade deste estudo com ampliação do grupo amostral e utilização de seqüenciamento por espectrometria de massa, permitirá identificar as demais proteínas diferencialmente expressas, assim como mapear quaisquer modificações em suas seqüências relacionadas a proteínas quiméricas.
Abstract: Proteomic analyses were carried out in order to verify the occurrence of modifications in the protein expression in hearts of Gallus gallus (domestic rooster), submitted to genomic integration of kinetoplast DNA (kDNA) of Trypanosoma cruzi. The present work utilized roosters, which are refractory to the infection by T. cruzi cells, containing the kDNA integrated in their genome through the inoculation of the parasite early in the embryonic developmental process. Negative control birds were utilized without any contact with the protozoan. Heart tissue extracts in those two conditions (kDNA positive and kDNA negative) were compared by two-dimensional electrophoresis for investigation of the existence of condition-specific or differentially expressed proteins. Two exclusive spots in the kDNA positive rooster sample were selected for identification, as well as two spots present in both conditions, which were taken as positive control for the validation of the technique. Through the use of peptide mass fingerprinting (PMF), three spots were identified: c-reactive protein, slow skeletal ventricular myosin alkali light chain 3 and cardiac actin. The first one performs an important role in the host immune system, being related with inflammation and cardiomyopathies. The fourth protein spot did not yield conclusive identification. It was not possible yet to directly relate the difference of protein expression with the integration of the kDNA into the host genome. The continuity of this work by expanding the sample group and utilization of mass spectrometry sequencing techniques will permit us to identify the further differentially expressed proteins, as well as to map any modifications in its sequences related to chimeric proteins.
Description: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.
Appears in Collections:FMD - Mestrado em Patologia Molecular (Dissertações)

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