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Título: Avaliação de peptídeos antimicrobianos e imunomoduladores : novas estratégias biotecnológicas para o preparo do dente para a revascularização pulpar
Autor(es): Sousa, Maurício Gonçalves da Costa
Orientador(es): Rezende, Taia Maria Berto
Assunto: Polpa dentária
Bactérias
Peptídeos
Antibióticos
Data de defesa: 21-Fev-2017
Citação: SOUSA, Maurício Gonçalves da Costa. Avaliação de peptídeos antimicrobianos e imunomoduladores: novas estratégias biotecnológicas para o preparo do dente para a revascularização pulpar. 2017. 195 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)—Universidade de Brasília, Brasília, 2017.
Resumo: Terapias regenerativas recentes como a revascularização pulpar vem ganhando espaço na endodontia em dentes permanentes imaturos. Porém o uso das medicações difundidas para técnica como a pasta dupla antibiótica (DAP) contendo metronidazol (MTZ) e ciprofloxaxino (CIP) ou tripla antibiótica (TAP) contendo CIP, MTZ e minociclina pode causar resistência, citotoxicidade e manchamento dentinário. Em contrapartida, peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) podem apresentar atividade antimicrobiana e imunomodulatória, surgindo como uma opção para a revascularização pulpar. Desta forma, este estudo objetivou avaliar o potencial antimicrobiano e imunomodulador de peptideos sintéticos (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 e LL-37), comparados à TAP e DAP em um modelo de infecção endodôntica in vitro. O estudo foi dividido em 3 etapas: (1) avaliação do potencial antimicrobiano dos fármacos de TAP e DAP (sozinhos ou em combinação) e dos PDHs contra as bactérias Staphylococcus aures (S.a.) e Enterococcus faecalis (E.f.) e o potencial sinérgico do CIP juntamente com IDR-1002; (2) comparação das concentrações encontradas neste estudo com as concentrações clínicas de TAP e DAP, através da viabilidade celular por MTT e produção de óxido nítrico (NO) pela reação de Griess, em linhagem de macrófagos RAW 264.7 e fibroblastos L929; (3) avaliação imunomodulatória, pela produção das citocinas IL-1α, IL-6, IL-12 e IL-10 e fator de necrose tumoral (TNF-α), por ELISA, além do NO em RAW 264.7 (RAW) e da IL-6 e NO em L929, com ou sem o recombinante de interferon gama (rIFN-γ) e antígenos mortos pelo calor (heat killed - HK)-S.a. ou HK-E.f. Na primeira etapa, o CIP se apresentou como o melhor antimicrobiano presente nas pastas e o IDR-1002, como o melhor PDH. Ademais, a combinação entre CIP e IDR-1002 apresentou ação sinérgica. A viabilidade celular não foi reduzida por nenhum dos grupos e TAP estimulou a produção de NO em RAW. Finalmente o PDH LL-37 reduziu significamente a viabilidade de células L929 e TAP, a viabilidade de RAW. Na ausência de estímulos antigênicos, TAP e DAP apresentaram um perfil pró-inflamatório na ausência dos estímulos antigênicos, aumentando na produção de IL-1α, TNF-α e IL-6 em células RAW e IL-6 em L929. Na adição dos estímulos antigênicos e rIFN-γ, as pastas apresentaram um perfil pró e anti-inflamatório: TAP reduziu a produção de IL-1α, IL-12 e IL-6 em RAW e aumentou TNF-α e NO, e a DAP reduziu a produção de IL-1α, IL-10 e IL-6 em RAW e aumentou IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 e a combinação de CIP com IDR-1002 apresentaram um perfil anti-inflamatório, reduzindo principalmente IL-6 e IL-12 na presença dos estímulos antigênicos e rIFN-γ. Em suma, a combinação sinérgica de CIP com IDR-1002 foi eficaz contra ambas bactérias e apresentou um papel anti-inflamatório neste modelo de infecção in vitro, podendo surgir como uma opção promissora para aplicações biotecnológicas envolvendo a revascularização pulpar.
Abstract: Recent regenerative therapies such as pulpal revascularization have been diffused in endodontics in immature permanent teeth. However, the use of medications such as double antibiotic paste (DAP) containing metronidazole (MTZ) and ciprofloxaxin (CIP) or triple antibiotic paste (TAP) containing CIP, MTZ and minocycline may cause resistance, cytotoxicity and dentin discoloration. On the other hand, host defense peptides (HDPs) have antimicrobial and immunomodulatory effects, emerging as an option for pulpal revascularization. Thus, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial and immunomodulatory potential of synthetic peptides (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 and LL-37) compared to TAP and DAP, in an in vitro endodontic infection model. For this, the study was divided in three stages: (1) antimicrobial potential of TAP and DAP drugs (alone or in combination) and HDPs against the bacteria Staphylococcus aures (S.a.) and Enterococcus faecalis (E.f.) and the synergistic potential of CIP and IDR-1002; (2) comparison of the findings of this study with TAP and DAP clinical concentrations, through cell viability by MTT and nitric oxide (NO) production by the Griess reaction, in RAW 264.7 macrophages and L929 fibroblasts; (3) immunomodulatory stage, by the evaluation of cytokines by ELISA: IL-1α, IL-6, IL-12, IL-10 and tumor necrosis factor (TNF-α), as well as NO in RAW 264.7 (RAW) and IL-6 and NO, in L929 with or without the recombinant interferon gamma (rIFN-γ) and heat killed antigens HK-S.a. or HK-E.f. In the first stage, CIP presented the best antimicrobial activity comparing to TAP and DAP containing antibiotics and IDR-1002, the best HDP. In addition, the combination between CIP and IDR-1002 was synergistic. The viability was not reduced by any groups and TAP stimulated NO production in RAW cells. Finally, LL-37 significantly reduced the viability of L929 and TAP, the RAW viability. Without any antigenic stimuli, TAP and DAP presented a pro-inflammatory profile up regulating IL-1α, TNF-α and IL-6 in RAW and IL-6, in L929. However, the addition of antigenic stimuli and rIFN-γ, TAP and DAP presented pro and anti-inflammatory profile reducing IL-1α, IL-12 and IL-6 in RAW and increasing TNF-α and NO, and reducing IL-1α, IL-10 and IL-6 in RAW and increasing IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 and the combination of CIP with IDR-1002 showed an anti-inflammatory profile, mainly reducing IL-6 and IL-12 with antigenic and rIFN-γ stimuli. In conclusion, the synergistic combination of CIP with IDR-1002 was effective against both bacteria and presented an anti-inflammatory role in this in vitro infection model may emerge as a promising option for biotechnological applications involving pulp revascularization.
Descrição: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017.
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Coorientador(es): Franco, Octávio Luiz
Aparece nas coleções:FS - Mestrado em Ciências da Saúde (Dissertações)

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